大鼠小气道上皮细胞

大鼠小气道上皮细胞

以Wistar大鼠为实验来源，经弹性蛋白酶消化法处理小气道组织后，通过Percoll密度梯度离心纯化获得上皮细胞，采用RPMI-1640培养基培养；通过多色流式细胞术检测CK7阳性率，透射电镜(TEM)定量E-cadherin表达量，结合免疫电镜综合评价细胞表型。

产品名称：大鼠小气道上皮细胞

英文名称： Rat Small Airway Epithelial Cells

组织来源： 肺组织

默认种属 ：大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠小气道上皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠小气道上皮细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 大鼠小气道上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3-5代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠小气道上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。

2. 提前配制冰预冷D-Hanks液、消化液（Ⅳ型胶原酶、透明质酸酶）、弹性蛋白酶、K-SFM培养基 + EGF + BSA（37℃预热）、双抗溶液。

3. SPF级SD大鼠（200-250g），10%水合氯醛腹腔注射麻醉，所有试剂冰浴预冷备用。

二、取材与预处理

1. 颈椎脱臼处死，碘伏消毒术野，无菌操作取出肺组织。

2. 浸入冰预冷D-Hanks液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。

3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。

三、细胞分离与消化

1. 组织碎块加入Ⅳ型胶原酶+透明质酸酶混合消化液，37℃消化32min，间断吹打。

2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。

3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。

四、纯化与接种培养

1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除团块和未消化组织。

2. 沉淀细胞用K-SFM培养基 + EGF + BSA重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-220000.0cells/cm²密度接种。

3. 放入37℃、5% CO2恒温培养箱，每2天换液一次，镜检观察多角形或铺路石样排列，贴壁生长，细胞间紧密连接及生长状态。

实验用SD大鼠或Wistar大鼠(200-250g)经10%水合氯醛(300mg/kg)腹腔注射后处死，立即取小气道组织置于冰预冷的DMEM培养基中，2小时内完成后续分离操作。

培养板需用1%明胶预包被1小时后PBS洗涤3次，晾干备用，未经处理的培养表面会导致小气道上皮贴壁率低于30%。

该细胞为贴壁生长型，体外可传代10-15次，建议每2天换液一次，传代比例控制在1:2以内以维持细胞正常形态和功能。

培养基中应加入K-SFM无血清培养基补充EGF和BSA，使用前需预热至37°C并预平衡CO2浓度至5%，血清批次更换前需进行预实验验证促生长效果。

换液操作全程注意无菌操作，使用经0.22μm滤膜过滤的新鲜培养基，加入后轻摇培养皿使培养基均匀分布，避免产生气泡影响细胞生长。