产品名称 | 大鼠前列腺基质细胞 | 组织来源 | 前列腺组织 |
英文名称 | Rat Prostate Stromal Cells | 种属 | 大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3511 |
方法简介 实验室分离的大鼠前列腺基质细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠前列腺基质细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 大鼠前列腺基质细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:3
传代特性： 可传5-8代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠前列腺基质细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：8-10周龄SPF级Wistar大鼠，体重200-250g，每只可获取1.0-1.8×10⁶个细胞，活力>90%
试剂：中性蛋白酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶、DNA酶、MEM培养基
分离纯化步骤
取目标组织用无钙镁PBS洗涤3次，剔除脂肪和结缔组织后剪成小碎片，加入中性蛋白酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶、DNA酶消化45-90分钟
滤过100目滤网后的细胞悬液加入等体积含10% FBS的培养基终止消化，400g离心10分钟
采用差速贴壁法去除杂细胞：细胞悬液接种于培养皿2-4小时，收集未贴壁细胞用于后续培养
原代培养要点
细胞重悬于完全培养基中，按3×10⁴密度接种，置于37℃、5% CO₂恒温培养箱
细胞在体外培养条件下生长稳定，形态保持一致性，连续培养3-5代后仍保持原有表型特征
常见问题优化
目标细胞占比低：优化消化条件提高目标细胞得率，改进分离策略减少非目标细胞污染
细胞活力差：严格控制消化时间，除消化步骤外全程冰上操作，使用新鲜配制试剂
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
大鼠丙酮酸脱氢酶激酶3(PDK3)elisa试剂盒 | RMG-I卵巢癌 |
大鼠丙酮酸脱氢酶激酶(PDK)elisa试剂盒 | 多功能诱导干细胞iPS(STR鉴定正确) |
大鼠蛋白二硫键异构酶(PDI)elisa试剂盒 | 人胰腺细胞JF-305 (STR鉴定正确) |
大鼠丙酮酸脱氢酶复合体(PDHC)elisa试剂盒 | 人永生化鼻咽上皮细胞系NP69(STR鉴定正确) |
大鼠低亲和力神经生长因子受体(CD271；LNGFR)elisa试剂盒 | 人脑髓母细胞细胞带荧光酶LN-229+LUC(STR鉴定正确) |
大鼠低氧促有丝分裂因子(HIMF)elisa试剂盒 | 鼻咽细胞株 5-8F（STR鉴定） |
猪白细胞介素6（IL-6）elisa试剂盒 | 人胰腺细胞HS 766T(STR鉴定正确) |
CTLA4 IG-24中国仓鼠卵巢细胞专用培养基 | EPX基因过表达细胞株 |
LS513人结直肠癌细胞专用培养基 | GMPPB基因过表达细胞株 |
人原代胆脂瘤细胞专用培养基 | FAM117B基因过表达细胞株 |
小鼠原代椎体终板软骨细胞专用培养基 | MTMR11基因过表达细胞株 |
人原代椎间盘纤维环细胞专用培养基 | ARB2A基因过表达细胞株 |
大鼠前列腺基质细胞PC12未分化细胞专用培养基 | GPR19基因过表达细胞株 |
鸡原代骨骼肌细胞专用培养基 | DNAI7基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术器械（剪刀、镊子、止血钳）及培养耗材经121℃高压灭菌20min；超净台紫外照射30min。
2. 配制冰预冷D-Hanks液、胶原酶Ⅳ+透明质酸酶混合消化液、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗、胎牛血清、双抗，全部冰浴预冷。
3. SPF级SD大鼠（200-250g），10%水合氯醛腹腔注射麻醉处理。
二、取材与预处理
1. 颈椎脱臼处死，体表酒精消毒，暴露目标组织器官。
2. 无菌条件下摘取前列腺组织，冰预冷D-Hanks液漂洗去除血液及杂质，去除周围结缔组织和脂肪。
3. 眼科剪将组织剪碎至1mm³小块，转入离心管。
三、细胞分离与消化
1. 剪碎组织加入胶原酶Ⅳ消化液，37℃水浴消化33min，期间每隔5-10min振荡吹打。
2. 用含血清培养基终止反应，经200目筛网过滤获取单细胞悬液。
3. 4℃、200g离心10min，弃上清，PBS洗涤两次，重悬细胞沉淀。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤膜过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除大颗粒杂质。
2. 用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗重悬细胞沉淀，调整接种密度后接种至明胶预包被的培养器皿。
3. 37℃、5% CO2培养，每2-3天换液一次，定期倒置显微镜观察长梭形或纺锤形，贴壁生长，呈旋涡状排列及生长情况。
