产品名称 | 大鼠卵泡颗粒细胞 | 组织来源 | 卵巢组织 |
英文名称 | Rat Follicular Granulosa Cells | 种属 | 大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3502 |
方法简介 实验室分离的大鼠卵泡颗粒细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠卵泡颗粒细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 大鼠卵泡颗粒细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠卵泡颗粒细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：4-6周龄清洁级SD大鼠，体重180-220g，每只可获得0.8-1.5×10⁶个细胞，活力>88%
试剂：0.25%胰蛋白酶-EDTA、Ⅳ型胶原酶、I型胶原酶、BSA、DMEM高糖培养基
分离纯化步骤
组织取材后迅速放入预冷PBS中转运，无菌操作下剔除周围组织，剪碎后加入0.25%胰蛋白酶-EDTA、Ⅳ型胶原酶、I型胶原酶、BSA于37℃消化30-60分钟
细胞悬液依次过100目、200目滤网去除未消化组织块，收集滤液后离心收集细胞
经Percoll不连续密度梯度离心（400g/400g，10分钟）分离纯化目标细胞层
原代培养要点
细胞重悬于完全培养基中，按3×10⁴密度接种，置于37℃、5% CO₂恒温培养箱
原代细胞贴壁生长，形态典型，接种后48小时开始增殖，第5-7天可达到亚融合状态
常见问题优化
细胞生长缓慢：检查血清批次质量，补充必要生长因子，确保CO₂浓度和温度稳定
纯度不达标：优化密度梯度离心条件，延长免疫磁珠孵育时间，增加洗涤步骤
细胞活力差：严格控制消化时间，除消化步骤外全程冰上操作，使用新鲜配制试剂
大鼠磷脂酰乙醇胺-N-甲基转移酶(PEMT)elisa试剂盒 | OVKATE卵巢癌 |
大鼠父系表达基因(PEG)elisa试剂盒 | 人肾小球系膜细胞HMC(STR鉴定正确) |
大鼠血小板内皮细胞粘附分子1(PECAM1;CD31)elisa试剂盒 | 小鼠气道平滑肌细胞ASMC （种属鉴定） |
大鼠吡哆醛；吡哆醇维生素B6激酶(PDXK)elisa试剂盒 | 大鼠肝细胞IAR20（种属鉴定） |
大鼠蛋白酶激活受体2(PAR2)elisa试剂盒 | 人恶性黑色细胞SK-MEL-2 (STR鉴定正确) |
大鼠蛋白质羟基(PHO)elisa试剂盒 | 小鼠杂交细胞 SDOW-17 （种属鉴定） |
猪半胱氨酸蛋白酶抑制剂3；胱抑素（CST3）elisa试剂盒 | 小鼠正常肝细胞NCTC1469（种属鉴定） |
CHO/dhFr-仓鼠卵巢,二氢叶酸还原酶缺陷细胞专用培养基 | FPR3基因过表达细胞株 |
LS1034人结肠腺癌细胞专用培养基 | CCR10基因过表达细胞株 |
人原代心脏微血管周细胞专用培养基 | EBF2基因过表达细胞株 |
猪原代胸腺成纤维细胞专用培养基 | CD19基因过表达细胞株 |
人原代子宫内膜基质细胞专用培养基 | GAN基因过表达细胞株 |
大鼠卵泡颗粒细胞PANC-1细胞专用培养基 | ASB14基因过表达细胞株 |
人原代乳腺成纤维细胞专用培养基 | FSCB基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。
2. 提前配制冰预冷D-Hanks液、消化液（胶原酶Ⅳ、透明质酸酶）、胰蛋白酶、K-SFM培养基 + EGF + BSA（37℃预热）、双抗溶液。
3. SPF级SD大鼠（200-250g），10%水合氯醛腹腔注射麻醉，所有试剂冰浴预冷备用。
二、取材与预处理
1. 颈椎脱臼处死，碘伏消毒术野，无菌操作取出卵巢组织。
2. 浸入冰预冷D-Hanks液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。
3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块加入胶原酶Ⅳ+透明质酸酶混合消化液，37℃消化47min，间断吹打。
2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。
3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除团块和未消化组织。
2. 沉淀细胞用K-SFM培养基 + EGF + BSA重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-220000.0cells/cm²密度接种。
3. 放入37℃、5% CO2恒温培养箱，每2天换液一次，镜检观察多角形或铺路石样排列，贴壁生长，细胞间紧密连接及生长状态。
