大鼠卵泡基膜细胞

大鼠卵泡基膜细胞

采用MACS分选从Sprague-Dawley大鼠的卵泡组织中分离获取基膜细胞，经0.25%胰蛋白酶-EDTA传代后，采用MCDB-131培养基维持培养；通过生物膜干涉技术(Biacore)检测CD73表达，结合蛋白质印迹分析CD133蛋白水平，并采用细胞增殖能力实验进一步验证细胞生物学特性。

产品名称：大鼠卵泡基膜细胞

英文名称： Rat Follicular Basement Membrane Cells

组织来源： 卵巢组织

默认种属 ：大鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的大鼠卵泡基膜细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的大鼠卵泡基膜细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 大鼠卵泡基膜细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3-5代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

大鼠卵泡基膜细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 手术器械（剪刀、镊子、止血钳）及培养耗材经121℃高压灭菌20min；超净台紫外照射30min。

2. 配制冰预冷D-Hanks液、胶原酶Ⅳ+透明质酸酶混合消化液、K-SFM培养基 + EGF + BSA、胎牛血清、双抗，全部冰浴预冷。

3. SPF级SD大鼠（200-250g），10%水合氯醛腹腔注射麻醉处理。

二、取材与预处理

1. 颈椎脱臼处死，体表酒精消毒，暴露目标组织器官。

2. 无菌条件下摘取卵巢组织，冰预冷D-Hanks液漂洗去除血液及杂质，去除周围结缔组织和脂肪。

3. 眼科剪将组织剪碎至1mm³小块，转入离心管。

三、细胞分离与消化

1. 剪碎组织加入胶原酶Ⅳ消化液，37℃水浴消化27min，期间每隔5-10min振荡吹打。

2. 用含血清培养基终止反应，经200目筛网过滤获取单细胞悬液。

3. 4℃、200g离心10min，弃上清，PBS洗涤两次，重悬细胞沉淀。

四、纯化与接种培养

1. 细胞悬液经40μm滤膜过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除大颗粒杂质。

2. 用K-SFM培养基 + EGF + BSA重悬细胞沉淀，调整接种密度后接种至明胶预包被的培养器皿。

3. 37℃、5% CO2培养，每2天换液一次，定期倒置显微镜观察多角形或铺路石样排列，贴壁生长，细胞间紧密连接及生长情况。

取材时必须在冰上低温操作，30分钟内完成卵巢卵泡组织的分离与纯化处理，室温暴露时间过长会直接导致细胞活性下降40%以上。

培养皿需用胶原蛋白-I型(5μg/cm2)包被过夜，次日PBS洗涤3次后使用，未包被表面卵泡基膜难以正常贴附和铺展。

该细胞具有贴壁生长特性，培养过程中需维持培养基pH在7.2-7.4之间，每2天更换新鲜培养基，传代时采用0.25%胰蛋白酶消化。

培养基配方中DMEM/F12含10% FBS和1%青霉素-链霉素为必需组分，添加顺序和方式需严格按照SOP操作，错误的添加顺序可能导致生长因子失活或沉淀形成。

日常维护中需每日检查细胞形态和培养基颜色，出现浑浊或颜色异常应立即换液并排查污染，传代后24小时内避免换液以利于细胞贴附恢复。