产品名称 | 大鼠结肠成纤维细胞 | 组织来源 | 结肠组织 |
英文名称 | Rat Colonic Fibroblasts | 种属 | 大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3497 |
方法简介 实验室分离的大鼠结肠成纤维细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠结肠成纤维细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 大鼠结肠成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:3
传代特性： 可传5-8代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠结肠成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：4-6周龄清洁级SD大鼠，体重180-220g，每只可获得0.8-1.5×10⁶个细胞，活力>88%
试剂：0.125%胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶、DNase I、透明质酸酶、RPMI-1640培养基
分离纯化步骤
取目标组织用无钙镁PBS洗涤3次，剔除脂肪和结缔组织后剪成小碎片，加入0.125%胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶、DNase I、透明质酸酶消化30-50分钟
滤过100目滤网后的细胞悬液加入等体积含10% FBS的培养基终止消化，400g离心10分钟
采用差速贴壁法去除杂细胞：细胞悬液接种于培养皿2-4小时，收集未贴壁细胞用于后续培养
原代培养要点
细胞重悬于完全培养基中，按3×10⁴密度接种，置于37℃、5% CO₂恒温培养箱
细胞贴壁生长较快，呈梭形，接种后24-48小时可见明显贴壁，第3-5天可达80-90%融合
常见问题优化
纯度不达标：优化密度梯度离心条件，延长免疫磁珠孵育时间，增加洗涤步骤
细胞贴壁率低：使用合适包被基质（胶原/纤维连接蛋白/多聚赖氨酸），优化接种密度
细胞生长缓慢：检查血清批次质量，补充必要生长因子，确保CO₂浓度和温度稳定
大鼠寡肽转运体1(PepT1)elisa试剂盒 | OV7卵巢癌 |
大鼠戊糖苷素(pentosidine)elisa试剂盒 | 高转移人肝细胞MHCC97-H(STR鉴定正确) |
大鼠青霉素(Penicillin)elisa试剂盒 | 人卵巢细胞SW626(STR鉴定正确) |
大鼠父系表达基因2(PEG2)elisa试剂盒 | 人大细胞肺耐药株NCI-H460/cis (STR鉴定正确) |
大鼠蛋白磷酸酶(PP)elisa试剂盒 | 非洲绿猴肾细胞CV-1（种属鉴定） |
大鼠蛋白酶(Pro)elisa试剂盒 | 人细胞COLO205(STR鉴定正确) |
猪半胱次磺酸脱羧酶（CSD）elisa试剂盒 | 犬肾细胞 MDCK-II（种属鉴定） |
CHL中国仓鼠肺细胞专用培养基 | CDH12基因过表达细胞株 |
LOVO/5FU人结直肠癌氟尿嘧啶耐药株细胞专用培养基 | SMYD4基因过表达细胞株 |
兔原代脑皮层神经元细胞专用培养基 | FANCF基因过表达细胞株 |
大鼠原代食管平滑肌细胞专用培养基 | ARB2A基因过表达细胞株 |
人原代子宫平滑肌细胞专用培养基 | DCT基因过表达细胞株 |
大鼠结肠成纤维细胞PANC05.04细胞专用培养基 | AVPR1A基因过表达细胞株 |
大鼠原代肺微血管内皮细胞专用培养基 | ZSCAN10基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。
2. 提前配制冰预冷D-Hanks液、消化液（EDTA、胰蛋白酶）、Ⅳ型胶原酶、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗（37℃预热）、双抗溶液。
3. SPF级SD大鼠（200-250g），10%水合氯醛腹腔注射麻醉，所有试剂冰浴预冷备用。
二、取材与预处理
1. 颈椎脱臼处死，碘伏消毒术野，无菌操作取出肠组织。
2. 浸入冰预冷D-Hanks液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。
3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块加入EDTA+胰蛋白酶混合消化液，37℃消化39min，间断吹打。
2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。
3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用差速贴壁法去除杂质细胞，去除团块和未消化组织。
2. 沉淀细胞用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-240000.0cells/cm²密度接种。
3. 放入37℃、5% CO2恒温培养箱，每2-3天换液一次，镜检观察长梭形或纺锤形，贴壁生长，细胞核大而圆，核仁明显及生长状态。
