产品名称 | 大鼠输卵管上皮细胞 | 组织来源 | 输卵管组织 |
英文名称 | Rat Oviductal Epithelial Cells | 种属 | 大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3491 |
方法简介 实验室分离的大鼠输卵管上皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠输卵管上皮细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 大鼠输卵管上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠输卵管上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：6-8周龄雄性SD大鼠，体重190-230g，单只取材可得0.9-1.6×10⁶个目标细胞，活率>92%
试剂：中性蛋白酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶、DNA酶、DMEM高糖培养基
分离纯化步骤
组织块经Hanks液反复冲洗后剪碎，加入中性蛋白酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶、DNA酶于37℃水浴消化45-90分钟，期间间歇振荡
消化产物经100目滤网过滤，PBS洗涤1次，400g离心10分钟收集细胞沉淀
细胞沉淀重悬于含10% FBS的培养基中，经Ficoll密度梯度离心（400g，10分钟）纯化目标细胞
原代培养要点
调整细胞浓度至3×10⁴，接种于胶原/纤维连接蛋白包被的培养皿中，37℃、5% CO₂培养
原代上皮细胞生长较慢，需5-7天方可达到亚融合，期间注意维持培养基中EGF浓度
常见问题优化
细胞形态异常：检查培养基pH值和渗透压，避免过度传代导致细胞老化
目标细胞占比低：优化消化条件提高目标细胞得率，改进分离策略减少非目标细胞污染
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
大鼠磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)elisa试剂盒 | OAW42卵巢癌 |
大鼠寡肽转运体(PepT)elisa试剂盒 | 中国仓鼠卵巢细胞CHO-K1（种属鉴定） |
大鼠戊糖苷素(pentosidine)elisa试剂盒 | 人外周血嗜碱性白血细胞 KU812 (STR鉴定正确) |
大鼠磷脂酰乙醇胺-N-甲基转移酶(PEMT)elisa试剂盒 | 小鼠细胞RM-1（种属鉴定） |
大鼠蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)elisa试剂盒 | 人急性非B非T淋巴细胞性白血细胞 Reh(STR鉴定正确) |
大鼠蛋白磷酸酶(PP)elisa试剂盒 | 人肺细胞DMS53(STR鉴定正确) |
猪半乳糖凝集素3（Gal-3）elisa试剂盒 | 人卵巢细胞荧光酶标记 SKOV3+luc (STR鉴定正确) |
BHK-21(C-13)仓鼠肾成纤维细胞专用培养基 | SP110基因过表达细胞株 |
lovo人结直肠癌细胞专用培养基 | C12orf4基因过表达细胞株 |
兔原代肾上腺髓质细胞专用培养基 | FSHR基因过表达细胞株 |
小鼠原代尾尖成纤维细胞专用培养基 | FBXO30基因过表达细胞株 |
人原代子宫微血管内皮细胞专用培养基 | ANKEF1基因过表达细胞株 |
大鼠输卵管上皮细胞PANC02细胞专用培养基 | FGD3基因过表达细胞株 |
大鼠原代肠巨噬细胞专用培养基 | ABHD1基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术器械（剪刀、镊子、止血钳）及培养耗材经121℃高压灭菌20min；超净台紫外照射30min。
2. 配制冰预冷D-Hanks液、胶原酶Ⅳ+透明质酸酶混合消化液、K-SFM培养基 + EGF + BSA、胎牛血清、双抗，全部冰浴预冷。
3. SPF级SD大鼠（200-250g），10%水合氯醛腹腔注射麻醉处理。
二、取材与预处理
1. 颈椎脱臼处死，体表酒精消毒，暴露目标组织器官。
2. 无菌条件下摘取输卵管组织，冰预冷D-Hanks液漂洗去除血液及杂质，去除周围结缔组织和脂肪。
3. 眼科剪将组织剪碎至1mm³小块，转入离心管。
三、细胞分离与消化
1. 剪碎组织加入胶原酶Ⅳ消化液，37℃水浴消化39min，期间每隔5-10min振荡吹打。
2. 用含血清培养基终止反应，经200目筛网过滤获取单细胞悬液。
3. 4℃、200g离心10min，弃上清，PBS洗涤两次，重悬细胞沉淀。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤膜过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除大颗粒杂质。
2. 用K-SFM培养基 + EGF + BSA重悬细胞沉淀，调整接种密度后接种至明胶预包被的培养器皿。
3. 37℃、5% CO2培养，每2天换液一次，定期倒置显微镜观察多角形或铺路石样排列，贴壁生长，细胞间紧密连接及生长情况。
