产品名称 | 大鼠外周血巨噬细胞 | 组织来源 | 外周血组织 |
英文名称 | Rat Peripheral Blood Macrophages | 种属 | 大鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3462 |
方法简介 实验室分离的大鼠外周血巨噬细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的大鼠外周血巨噬细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 大鼠外周血巨噬细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 不规则形
传代比例： -
传代特性： 不传代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠外周血巨噬细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：6-8周龄雄性SD大鼠，体重190-230g，单只取材可得0.9-1.6×10⁶个目标细胞，活率>92%
试剂：0.125%胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶、DNase I、透明质酸酶、MEM培养基
分离纯化步骤
脾脏取出后置于预冷PBS中，用注射器针筒研磨过滤，300g离心10分钟收集细胞
细胞悬液经200目滤网过滤去除组织碎片，400g离心10分钟收集细胞沉淀，PBS洗涤1次
利用CD45磁珠阳性选择策略特异性富集白细胞，纯度>90%
原代培养要点
细胞重悬于含相应细胞因子的完全培养基中，按适当密度接种于低吸附培养皿，37℃、5% CO₂培养
免疫细胞体外存活期有限，建议实验在取材后7-14天内完成，期间定期检测细胞活力
常见问题优化
细胞活化状态改变：缩短体外培养时间，避免过度刺激导致细胞表型改变
细胞贴壁率低：免疫细胞本为悬浮生长，注意使用低吸附培养器皿
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
大鼠胃蛋白酶原A(PGA)elisa试剂盒 | RPMI 6666淋巴癌 |
大鼠前列腺素2(PG2)elisa试剂盒 | 大鼠脑微周细胞 |
大鼠蛋白多糖(PG)elisa试剂盒 | 大鼠海绵体平滑肌细胞 |
大鼠胃蛋白酶原(PG)elisa试剂盒 | 人卵巢颗粒细胞 |
大鼠蛋白多糖(PG)elisa试剂盒 | 人骨髓来源巨噬细胞 |
大鼠蛋白二硫键异构酶(PDI)elisa试剂盒 | 人细胞 |
猪补体蛋白8（C8）elisa试剂盒 | 人宫颈成纤维细胞 |
U266人骨髓瘤细胞专用培养基 | ZNF148基因过表达细胞株 |
CHO-K1（悬浮）中国仓鼠卵巢k1 亚克隆系细胞专用培养基 | ADGRE3基因过表达细胞株 |
兔原代脑动脉血管内皮细胞专用培养基 | FBXO30基因过表达细胞株 |
HELA-S3细胞专用培养基 | CASS4基因过表达细胞株 |
大鼠原代心肌干细胞专用培养基 | FSCB基因过表达细胞株 |
大鼠外周血巨噬细胞大鼠原代肾上皮细胞专用培养基 | CDH12基因过表达细胞株 |
HepG2细胞专用培养基 | COG6基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术器械（剪刀、镊子、止血钳）及培养耗材经121℃高压灭菌20min；超净台紫外照射30min。
2. 配制冰预冷D-Hanks液、胶原酶Ⅳ+透明质酸酶混合消化液、RPMI-1640 + 10% FBS + 1% 双抗 + 50μM β-ME、胎牛血清、双抗，全部冰浴预冷。
3. SPF级SD大鼠（200-250g），10%水合氯醛腹腔注射麻醉处理。
二、取材与预处理
1. 颈椎脱臼处死，体表酒精消毒，暴露目标组织器官。
2. 无菌条件下摘取目标组织，冰预冷D-Hanks液漂洗去除血液及杂质，去除周围结缔组织和脂肪。
3. 眼科剪将组织剪碎至1mm³小块，转入离心管。
三、细胞分离与消化
1. 剪碎组织加入胶原酶Ⅳ消化液，37℃水浴消化27min，期间每隔5-10min振荡吹打。
2. 用含血清培养基终止反应，经200目筛网过滤获取单细胞悬液。
3. 4℃、200g离心10min，弃上清，PBS洗涤两次，重悬细胞沉淀。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经200μm滤膜过滤，采用Ficoll密度梯度离心分离单个核细胞，去除大颗粒杂质。
2. 用RPMI-1640 + 10% FBS + 1% 双抗 + 50μM β-ME重悬细胞沉淀，调整接种密度后接种至未涂层预包被的培养器皿。
3. 37℃、5% CO2培养，每2天更换新鲜培养基，定期倒置显微镜观察悬浮或半贴壁生长，圆形或椭圆形，折光性强及生长情况。
