人肾脏微血管内皮细胞

人肾脏微血管内皮细胞

以手术废弃组织为实验来源，经胰蛋白酶消化法处理脏微血管组织后，通过Percoll密度梯度离心纯化获得内皮细胞，采用MEM基础培养基培养；通过ATAC-seq检测CD31阳性率，代谢组学分析定量Podocalyxin表达量，结合蛋白质印迹综合评价细胞表型。

产品名称：人肾脏微血管内皮细胞

英文名称： Human Renal Microvascular Endothelial Cells

组织来源： 肾组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人肾脏微血管内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的人肾脏微血管内皮细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 人肾脏微血管内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3-5代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人肾脏微血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 手术器械（剪刀、镊子、止血钳）及培养耗材经121℃高压灭菌20min；超净台紫外照射30min。

2. 配制冰预冷PBS缓冲液、Ⅳ型胶原酶+胶原酶Ⅱ混合消化液、DMEM/F12 + 20% FBS + 50μg/mL 肝素 + 1% 双抗、胎牛血清、双抗，全部冰浴预冷。

3. 人源组织样本（临床手术废弃组织）处理。

二、取材与预处理

1. 经伦理委员会批准获取，体表酒精消毒，暴露目标组织器官。

2. 无菌条件下摘取肾组织，冰预冷PBS缓冲液漂洗去除血液及杂质，去除周围结缔组织和脂肪。

3. 眼科剪将组织剪碎至1mm³小块，转入离心管。

三、细胞分离与消化

1. 剪碎组织加入Ⅳ型胶原酶消化液，37℃水浴消化27min，期间每隔5-10min振荡吹打。

2. 用含血清培养基终止反应，经200目筛网过滤获取单细胞悬液。

3. 4℃、200g离心10min，弃上清，PBS洗涤两次，重悬细胞沉淀。

四、纯化与接种培养

1. 细胞悬液经40μm滤膜过滤，采用Percoll密度梯度离心纯化内皮细胞，去除大颗粒杂质。

2. 用DMEM/F12 + 20% FBS + 50μg/mL 肝素 + 1% 双抗重悬细胞沉淀，调整接种密度后接种至胶原预包被的培养器皿。

3. 37℃、5% CO2培养，每2-3天换液一次，定期倒置显微镜观察鹅卵石样铺路石状排列，贴壁生长，细胞边界清晰及生长情况。

健康成人手术废弃组织经局部麻醉后，无菌操作下取出肾脏组织，迅速去除周围脂肪组织和结缔组织，用预冷HBSS洗涤3次备用。

实验用培养皿应提前用0.01%聚鸟氨酸室温孵育2小时，PBS洗涤后风干，该预处理对脏微血管内皮的初始贴附具有决定性作用。

该细胞为贴壁生长型，体外可传代10-15次，建议每2天换液一次，传代比例控制在1:2以内以维持细胞正常形态和功能。

培养基配方中GM299培养基含20% FBS、5ng/ml VEGF和10ng/ml FGF为必需组分，添加顺序和方式需严格按照SOP操作，错误的添加顺序可能导致生长因子失活或沉淀形成。

换液前先用倒置显微镜观察细胞贴壁情况和形态特征，确认无污染后缓慢吸除旧培养基，沿壁缓慢加入预热的新鲜培养基，避免直接冲洗细胞层。