人羊膜上皮细胞

人羊膜上皮细胞

采用中性蛋白酶+胶原酶消化从伦理批准的人源组织的相关组织中分离获取上皮细胞，经0.25%胰蛋白酶-EDTA传代后，采用含10%胎牛血清的完全培养基维持培养；通过细胞免疫荧光检测EpCAM表达，结合免疫荧光双标技术分析CD326蛋白水平，并采用蛋白质组学(质谱)进一步验证细胞生物学特性。

产品名称：人羊膜上皮细胞

英文名称： Human Amniotic Epithelial Cells

组织来源： 羊膜组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人羊膜上皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的人羊膜上皮细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 人羊膜上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3-5代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人羊膜上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。

2. 提前配制冰预冷PBS缓冲液、消化液（胶原酶Ⅳ、透明质酸酶）、胰蛋白酶、K-SFM培养基 + EGF + BSA（37℃预热）、双抗溶液。

3. 人源组织样本（临床手术废弃组织），所有试剂冰浴预冷备用。

二、取材与预处理

1. 经伦理委员会批准获取，碘伏消毒术野，无菌操作取出胎盘组织。

2. 浸入冰预冷PBS缓冲液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。

3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。

三、细胞分离与消化

1. 组织碎块加入胶原酶Ⅳ+透明质酸酶混合消化液，37℃消化35min，间断吹打。

2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。

3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。

四、纯化与接种培养

1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除团块和未消化组织。

2. 沉淀细胞用K-SFM培养基 + EGF + BSA重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-200000.0cells/cm²密度接种。

3. 放入37℃、5% CO2恒温培养箱，每2天换液一次，镜检观察多角形或铺路石样排列，贴壁生长，细胞间紧密连接及生长状态。

取材操作全程在超净台中进行，羊膜组织取出后尽快去除血管和结缔组织，用含1% P/S的PBS清洗至组织变白，整个过程温度控制在4°C。

培养器皿必须提前用0.1mg/ml胶原酶I包被过夜，未包被的培养板膜上皮贴壁效率极低，影响后续实验结果。

该细胞具有贴壁生长特性，培养过程中需维持培养基pH在7.2-7.4之间，每2天更换新鲜培养基，传代时采用0.25%胰蛋白酶消化。

培养体系中必须补充K-SFM无血清培养基补充EGF和BSA，生长因子浓度需严格按照方案配制，浓度过高可能导致细胞异常分化，浓度过低则细胞增殖受限。

培养过程中定期观察培养基pH变化(颜色由红变黄提示需换液)，换液频率根据细胞密度调整，高密度时每日换液一次，低密度时每2-3天换液。