人关节韧带成纤维细胞

人关节韧带成纤维细胞

取材自伦理批准的人源组织的节韧带组织，经中性蛋白酶+胶原酶消化获取原代成纤维细胞，接种于胶原预包被培养皿中，采用含10% FBS的DMEM培养；通过透射电镜(TEM)鉴定vimentin表达特征，钙流检测检测Thy-1表达水平，并采用细胞周期分析评估细胞功能状态。 经9次传代后仍保持稳定的表型特征。

产品名称：人关节韧带成纤维细胞

英文名称： Human Joint Ligament Fibroblasts

组织来源： 关节韧带组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人关节韧带成纤维细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的人关节韧带成纤维细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 人关节韧带成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:3

传代特性： 可传5-8代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人关节韧带成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。

2. 提前配制冰预冷PBS缓冲液、消化液（胶原酶Ⅰ、胶原酶Ⅱ）、透明质酸酶、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗（37℃预热）、双抗溶液。

3. 人源组织样本（临床手术废弃组织），所有试剂冰浴预冷备用。

二、取材与预处理

1. 经伦理委员会批准获取，碘伏消毒术野，无菌操作取出关节组织。

2. 浸入冰预冷PBS缓冲液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。

3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。

三、细胞分离与消化

1. 组织碎块加入胶原酶Ⅰ+胶原酶Ⅱ混合消化液，37℃消化46min，间断吹打。

2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。

3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。

四、纯化与接种培养

1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用差速贴壁法去除杂质细胞，去除团块和未消化组织。

2. 沉淀细胞用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-210000.0cells/cm²密度接种。

3. 放入37℃、5% CO2恒温培养箱，每2-3天换液一次，镜检观察长梭形或纺锤形，贴壁生长，细胞核大而圆，核仁明显及生长状态。

实验用健康成人手术废弃组织(成人)经局部麻醉后处死，立即取关节组织置于冰预冷的DMEM培养基中，2小时内完成后续分离操作。

培养器皿提前用0.1mg/ml纤连蛋白包被过夜，4°C保存，使用前用PBS洗涤2次，该处理可显著促进节韧带成纤维的贴壁生长。

该细胞为贴壁型细胞，体外培养条件下可稳定增殖，建议每2-3天换液，传代比例1:3，培养温度严格控制在37°C。

培养体系中需添加DMEM/F12含10% FBS和1%青霉素-链霉素，血清应选用优质胎牛血清(FBS)，批次间差异可能显著影响细胞生长，建议同一实验使用同一批次血清。

日常维护中需每日检查细胞形态和培养基颜色，出现浑浊或颜色异常应立即换液并排查污染，传代后24小时内避免换液以利于细胞贴附恢复。