产品名称 | 人羊膜间充质干细胞 | 组织来源 | 羊膜组织 |
英文名称 | Human Amniotic Membrane Mesenchymal Stem Cells | 种属 | 人 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3455 |
方法简介 实验室分离的人羊膜间充质干细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的人羊膜间充质干细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 人羊膜间充质干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:3
传代特性： 可传10代以上
消化液： 0.25%胰蛋白酶
人羊膜间充质干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：健康成人供体（18-55岁），手术废弃组织经伦理委员会批准获取，每例可分离1.0-3.0×10⁶个细胞，活力>85%
试剂：中性蛋白酶、胶原酶D、透明质酸酶、FBS、DMEM高糖培养基
分离纯化步骤
组织取材后迅速放入预冷PBS中转运，无菌操作下剔除周围组织，剪碎后加入中性蛋白酶、胶原酶D、透明质酸酶、FBS于37℃消化30-60分钟
消化液经100目不锈钢滤网过滤，收集滤液，4℃、400g离心10分钟收集细胞沉淀
细胞沉淀重悬于含10% FBS的培养基中，经Ficoll密度梯度离心（400g，10分钟）纯化目标细胞
原代培养要点
细胞重悬于完全培养基中，按3×10⁴密度接种，置于37℃、5% CO₂恒温培养箱
干细胞增殖较慢，接种后3-5天可见小集落形成，7-10天可达到传代密度
常见问题优化
细胞活力差：严格控制消化时间，除消化步骤外全程冰上操作，使用新鲜配制试剂
细胞贴壁率低：使用合适包被基质（胶原/纤维连接蛋白/多聚赖氨酸），优化接种密度
培养过程中出现污染：严格无菌操作，培养基中添加适量抗生素，定期检测支原体
大鼠阻抑素(PHB)elisa试剂盒 | EB2淋巴癌 |
大鼠肽聚糖识别蛋白(PGRP))elisa试剂盒 | 人单核细胞 |
大鼠磷酸化G蛋白偶合受体激酶2(p-GRK2)elisa试剂盒 | 猪B淋巴细胞 |
大鼠磷酸激酶C(PGKC)elisa试剂盒 | 大鼠软骨细胞 |
大鼠胆固醇酯转移蛋白(CETP)elisa试剂盒 | 人结直肠腺癌细胞COLO320HSR(STR鉴定正确) |
大鼠胆碱;乙醇胺磷酸转移酶1(CEPT1)elisa试剂盒 | 犬主动脉内皮细胞 |
猪触珠蛋白（Hap）elisa试剂盒 | 人原代脐带间充质干细胞 |
TOV-112D人上皮性卵巢癌细胞专用培养基 | B3GNT9基因过表达细胞株 |
RLE-6TN大鼠肺泡II型细胞专用培养基 | DCT基因过表达细胞株 |
大鼠原代晶状体上皮细胞专用培养基 | AVPR1A基因过表达细胞株 |
HCC-LM3细胞专用培养基 | ADH1A基因过表达细胞株 |
大鼠原代牙周膜干细胞专用培养基 | EPM2AIP1基因过表达细胞株 |
人羊膜间充质干细胞大鼠原代前列腺上皮细胞专用培养基 | HEY2基因过表达细胞株 |
HCT-15/Taxol细胞专用培养基 | PTPDC1基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。
2. 提前配制冰预冷PBS缓冲液、消化液（胶原酶Ⅳ、透明质酸酶）、胰蛋白酶、α-MEM + 10% FBS + 1% 双抗（37℃预热）、双抗溶液。
3. 人源组织样本（临床手术废弃组织），所有试剂冰浴预冷备用。
二、取材与预处理
1. 经伦理委员会批准获取，碘伏消毒术野，无菌操作取出胎盘组织。
2. 浸入冰预冷PBS缓冲液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。
3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块加入胶原酶Ⅳ+透明质酸酶混合消化液，37℃消化31min，间断吹打。
2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。
3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用Percoll密度梯度离心富集干细胞，去除团块和未消化组织。
2. 沉淀细胞用α-MEM + 10% FBS + 1% 双抗重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-210000.0cells/cm²密度接种。
3. 放入37℃、5% CO2恒温培养箱，每2天换液一次，镜检观察梭形或多角形，贴壁生长，核质比高，核仁明显及生长状态。
