产品名称 | 人气管成纤维细胞 | 组织来源 | 气管组织 |
英文名称 | Human Tracheal Fibroblasts | 种属 | 人 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3454 |
方法简介 实验室分离的人气管成纤维细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的人气管成纤维细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 人气管成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:3
传代特性： 可传5-8代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
人气管成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：成年患者（25-60岁）手术切除标本，经患者知情同意及伦理审批，单份组织可得0.5-2.0×10⁶个细胞，活率>88%
试剂：中性蛋白酶、胶原酶D、透明质酸酶、FBS、RPMI-1640培养基
分离纯化步骤
组织块经Hanks液反复冲洗后剪碎，加入中性蛋白酶、胶原酶D、透明质酸酶、FBS于37℃水浴消化30-60分钟，期间间歇振荡
消化产物经100目滤网过滤，PBS洗涤1次，400g离心10分钟收集细胞沉淀
经Percoll不连续密度梯度离心（400g/400g，10分钟）分离纯化目标细胞层
原代培养要点
调整细胞密度至3×10⁴接种于预处理培养皿，37℃、5% CO₂培养箱培养
细胞贴壁生长较快，呈梭形，接种后24-48小时可见明显贴壁，第3-5天可达80-90%融合
常见问题优化
细胞形态异常：检查培养基pH值和渗透压，避免过度传代导致细胞老化
目标细胞占比低：优化消化条件提高目标细胞得率，改进分离策略减少非目标细胞污染
细胞活力差：严格控制消化时间，除消化步骤外全程冰上操作，使用新鲜配制试剂
大鼠阻抑素2(PHB2)elisa试剂盒 | EB1淋巴癌 |
大鼠甲状旁激素1-34(PH1-34)elisa试剂盒 | 人T淋巴细胞 |
大鼠肽聚糖识别蛋白(PGRP))elisa试剂盒 | 猪脂肪干细胞 |
大鼠孕酮受体(PGR)elisa试剂盒 | 小鼠软骨细胞 |
大鼠胆固醇侧链裂解酶P450scc(CSLP450scc)elisa试剂盒 | 大鼠垂体瘤细胞GH3（种属鉴定） |
大鼠胆固醇酯转移蛋白(CETP)elisa试剂盒 | 人胶质瘤细胞 |
猪传染性胃肠炎病毒抗体（TGEV Ab）elisa试剂盒 | 人原代结肠间质细胞（便秘患者） |
TOV-112D人上皮性卵巢癌细胞专用培养基 | GLT1D1基因过表达细胞株 |
RIN-m5f大鼠β胰岛素瘤细胞专用培养基 | GPR19基因过表达细胞株 |
人原代Ⅱ型肺泡上皮细胞专用培养基 | ATRIP基因过表达细胞株 |
HCC-LM3+LUC细胞专用培养基 | LONRF2基因过表达细胞株 |
大鼠原代眼外肌成纤维细胞专用培养基 | COG6基因过表达细胞株 |
人气管成纤维细胞大鼠原代前列腺基底细胞专用培养基 | FAM76B基因过表达细胞株 |
HCT-15/Fu 细胞专用培养基 | ADRA1A基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术剪、镊子、培养耗材高压灭菌；超净台紫外通风30min。
2. 配制灌洗液 冰预冷PBS缓冲液、消化液（胶原酶Ⅳ、透明质酸酶、胰蛋白酶）、K-SFM培养基 + EGF + BSA、双抗。
3. 人源组织样本（临床手术废弃组织），冰浴预冷所有缓冲液。
二、取材与预处理
1. 经伦理委员会批准获取，75%酒精浸泡消毒体表，无菌操作下暴露并摘取成纤维细胞。
2. 置于冰预冷PBS缓冲液中反复漂洗，去除血污及附属组织，仔细剔除结缔组织。
3. 将纯化后的成纤维细胞组织用眼科剪尽量剪碎，尽量减小组织块大小以利消化。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块与胶原酶Ⅳ+透明质酸酶+胰蛋白酶混合酶液按1:3比例混合，37℃振荡消化47min。
2. 加入含20% FBS的培养基中和酶活性，反复吹打使组织充分分散。
3. 细胞悬液经40μm滤网过滤，2次200g×10min离心洗涤，收集细胞。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤网过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除未消化组织块。
2. 用K-SFM培养基 + EGF + BSA调整细胞浓度至120000.0cells/mL，接种于预涂明胶的培养皿中。
3. 置于37℃、5% CO2培养箱中培养，每2天换液一次，倒置显微镜下观察细胞贴壁及多角形或铺路石样排列，贴壁生长，细胞间紧密连接。
