人真皮毛乳头细胞

人真皮毛乳头细胞

以手术废弃组织相关组织为材料，采用免疫荧光分选分离毛乳头细胞，经胰蛋白酶-EDTA消化后传代，使用含10% FBS的DMEM/F12维持细胞生长；运用间接免疫荧光检测CD44的细胞表面/胞内表达，通过Matrigel侵袭实验分析蛋白表达谱，并结合bulk RNA-seq探究相关信号通路。

产品名称：人真皮毛乳头细胞

英文名称： Human Dermal Papilla Cells

组织来源： 真皮组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人真皮毛乳头细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的人真皮毛乳头细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 人真皮毛乳头细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3-5代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人真皮毛乳头细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 准备无菌手术器械（手术剪、镊子、眼科剪）、培养耗材，高压灭菌后备用；超净工作台紫外消毒。

2. 提前配制冰预冷PBS缓冲液、消化液（Ⅰ型胶原酶、Dispase II）、胰蛋白酶、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗（37℃预热）、双抗溶液。

3. 人源组织样本（临床手术废弃组织），所有试剂冰浴预冷备用。

二、取材与预处理

1. 经伦理委员会批准获取，碘伏消毒术野，无菌操作取出皮肤组织。

2. 浸入冰预冷PBS缓冲液中冲洗干净，仔细分离去除血管、神经及结缔组织。

3. 将组织转移至新的培养皿中，用手术剪精细剪碎成细小碎块。

三、细胞分离与消化

1. 组织碎块加入Ⅰ型胶原酶+Dispase II混合消化液，37℃消化31min，间断吹打。

2. 加入含10% FBS的培养基终止消化，吹打制备单细胞悬液。

3. 200g离心10min收集细胞沉淀，PBS重悬洗涤两遍。

四、纯化与接种培养

1. 细胞悬液过40μm细胞滤网，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除团块和未消化组织。

2. 沉淀细胞用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗重悬，台盼蓝染色检测活力（应>90%），以60000.0-210000.0cells/cm²密度接种。

3. 放入37℃、5% CO2恒温培养箱，每2-3天换液一次，镜检观察形态因细胞类型而异，贴壁或悬浮生长及生长状态。

健康成人手术废弃组织经局部麻醉后，无菌操作下取出毛乳头组织，迅速去除周围脂肪组织和结缔组织，用预冷HBSS洗涤3次备用。

培养器皿必须提前用0.1mg/ml胶原酶I包被过夜，未包被的培养板皮毛乳头贴壁效率极低，影响后续实验结果。

该细胞为贴壁生长型，体外可传代10-15次，建议每2天换液一次，传代比例控制在1:2以内以维持细胞正常形态和功能。

培养体系中需添加DMEM/F12含10% FBS和1% P/S，血清应选用优质胎牛血清(FBS)，批次间差异可能显著影响细胞生长，建议同一实验使用同一批次血清。

培养过程中定期观察培养基pH变化(颜色由红变黄提示需换液)，换液频率根据细胞密度调整，高密度时每日换液一次，低密度时每2-3天换液。