产品名称 | 人终板软骨细胞 | 组织来源 | 椎间盘组织 |
英文名称 | Human Endplate Chondrocytes | 种属 | 人 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3444 |
方法简介 实验室分离的人终板软骨细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的人终板软骨细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 人终板软骨细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 多边形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
人终板软骨细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：成年患者（25-60岁）手术切除标本，经患者知情同意及伦理审批，单份组织可得0.5-2.0×10⁶个细胞，活率>88%
试剂：中性蛋白酶、胶原酶D、透明质酸酶、FBS、DMEM/F12完全培养基
分离纯化步骤
组织块经Hanks液反复冲洗后剪碎，加入中性蛋白酶、胶原酶D、透明质酸酶、FBS于37℃水浴消化120-180分钟，期间间歇振荡
滤过70目滤网后的细胞悬液加入等体积含10% FBS的培养基终止消化，500g离心12分钟
利用免疫磁珠分选技术（MACS）纯化目标细胞，纯度可达80%以上
原代培养要点
细胞重悬于完全培养基中，按2×10⁴密度接种，置于37℃、5% CO₂恒温培养箱
细胞贴壁生长较慢，需5-7天方可达到亚融合，期间注意维持培养基新鲜度
常见问题优化
细胞活力差：严格控制消化时间，除消化步骤外全程冰上操作，使用新鲜配制试剂
纯度不达标：优化密度梯度离心条件，延长免疫磁珠孵育时间，增加洗涤步骤
细胞生长缓慢：检查血清批次质量，补充必要生长因子，确保CO₂浓度和温度稳定
大鼠蛋白激酶C(PKC)elisa试剂盒 | GHS1金黄地鼠皮肤成纤维细胞 |
大鼠蛋白激酶ACβ(PKACβ)elisa试剂盒 | 鸡真皮成纤维细胞 |
大鼠蛋白激酶ACα(PKAcα)elisa试剂盒 | 猪胸腺成纤维细胞 |
大鼠前动力蛋白2(PK2)elisa试剂盒 | 人脐动脉内皮细胞 |
大鼠促性腺激素抑制激素(GnIH)elisa试剂盒 | 人绒毛膜癌细胞JEG-3(STR鉴定正确) |
大鼠促胰液素(secretin)elisa试剂盒 | 大鼠主动脉瓣膜间质细胞 |
猪胆囊收缩素;缩胆囊素八肽（CCK-8）elisa试剂盒 | 大鼠原代肾动脉平滑肌细胞 |
SIHa人子宫颈鳞癌细胞专用培养基 | CDK20基因过表达细胞株 |
PC12低分化+GFP大鼠肾上腺嗜铬瘤低分化+GFP细胞专用培养基 | AVPR1A基因过表达细胞株 |
兔原代小肠平滑肌细胞专用培养基 | ABHD1基因过表达细胞株 |
HCC1833细胞专用培养基 | COG6基因过表达细胞株 |
大鼠原代支气管平滑肌细胞专用培养基 | HEY2基因过表达细胞株 |
人终板软骨细胞大鼠原代皮下微血管内皮细胞专用培养基 | KLHL1基因过表达细胞株 |
HCC-94 细胞专用培养基 | CYLC1基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术剪、镊子、培养耗材高压灭菌；超净台紫外通风30min。
2. 配制灌洗液 冰预冷PBS缓冲液、消化液（Ⅱ型胶原酶+透明质酸酶）+胰蛋白酶、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗 + 10ng/mL TGF-β、双抗。
3. 人源组织样本（临床手术废弃组织），冰浴预冷所有缓冲液。
二、取材与预处理
1. 经伦理委员会批准获取，75%酒精浸泡消毒体表，无菌操作下暴露并摘取软骨。
2. 置于冰预冷PBS缓冲液中反复漂洗，去除血污及附属组织，仔细剔除结缔组织。
3. 将纯化后的软骨组织用眼科剪尽量剪碎，尽量减小组织块大小以利消化。
三、细胞分离与消化
1. 组织碎块与Ⅱ型胶原酶+透明质酸酶+胰蛋白酶混合酶液按1:3比例混合，37℃振荡消化35min。
2. 加入含20% FBS的培养基中和酶活性，反复吹打使组织充分分散。
3. 细胞悬液经40μm滤网过滤，1次200g×10min离心洗涤，收集细胞。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤网过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除未消化组织块。
2. 用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗 + 10ng/mL TGF-β调整细胞浓度至100000.0cells/mL，接种于预涂明胶的培养皿中。
3. 置于37℃、5% CO2培养箱中培养，每3天换液一次，倒置显微镜下观察细胞贴壁及圆形或椭圆形，贴壁生长，胞质丰富，可见基质分泌。
