人胃癌组织成纤维细胞

人胃癌组织成纤维细胞

基于组织块贴壁结合酶消化技术从健康成人供体癌组织组织中分离原代成纤维细胞，在专用培养液中培养扩增；利用流式细胞术(FCM)结合ROS检测对vimentin, Collagen I进行多参数检测，并通过Western blot验证目标蛋白的表达与功能。 冻存复苏后细胞存活率可达93%以上。

产品名称：人胃癌组织成纤维细胞

英文名称： Human Gastric Cancer Tissue Fibroblasts

组织来源： 胃组织

默认种属 ：人

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的人胃癌组织成纤维细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的人胃癌组织成纤维细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 人胃癌组织成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:3

传代特性： 可传5-8代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

人胃癌组织成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 手术剪、镊子、培养耗材高压灭菌；超净台紫外通风30min。

2. 配制灌洗液 冰预冷PBS缓冲液、消化液（胶原酶Ⅳ+胰蛋白酶）+透明质酸酶、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗、双抗。

3. 人源组织样本（临床手术废弃组织），冰浴预冷所有缓冲液。

二、取材与预处理

1. 经伦理委员会批准获取，75%酒精浸泡消毒体表，无菌操作下暴露并摘取胃。

2. 置于冰预冷PBS缓冲液中反复漂洗，去除血污及附属组织，仔细剔除结缔组织。

3. 将纯化后的胃组织用眼科剪尽量剪碎，尽量减小组织块大小以利消化。

三、细胞分离与消化

1. 组织碎块与胶原酶Ⅳ+胰蛋白酶+透明质酸酶混合酶液按1:3比例混合，37℃振荡消化47min。

2. 加入含20% FBS的培养基中和酶活性，反复吹打使组织充分分散。

3. 细胞悬液经40μm滤网过滤，2次200g×10min离心洗涤，收集细胞。

四、纯化与接种培养

1. 细胞悬液经40μm滤网过滤，采用差速贴壁法去除杂质细胞，去除未消化组织块。

2. 用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗调整细胞浓度至120000.0cells/mL，接种于预涂胶原的培养皿中。

3. 置于37℃、5% CO2培养箱中培养，每2-3天换液一次，倒置显微镜下观察细胞贴壁及长梭形或纺锤形，贴壁生长，细胞核大而圆，核仁明显。

取材操作全程在超净台中进行，胃癌组织取出后尽快去除血管和结缔组织，用含1% P/S的PBS清洗至组织变白，整个过程温度控制在4°C。

培养板需用1%明胶预包被1小时后PBS洗涤3次，晾干备用，未经处理的培养表面会导致癌组织成纤维贴壁率低于30%。

该细胞具有贴壁生长特性，培养过程中需维持培养基pH在7.2-7.4之间，每2天更换新鲜培养基，传代时采用0.25%胰蛋白酶消化。

培养体系中必须补充DMEM/F12含10% FBS和1%青霉素-链霉素，生长因子浓度需严格按照方案配制，浓度过高可能导致细胞异常分化，浓度过低则细胞增殖受限。

换液时仅更换1/2至2/3体积的新鲜培养基，避免完全换液造成已贴壁细胞脱落，操作时吸管尖端距培养面至少1cm高处缓慢加入。