产品名称 | 人肝实质细胞 | 组织来源 | 肝组织 |
英文名称 | Human Hepatocytes（Human Hepatic Parenchymal Cells） | 种属 | 人 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2852 |
方法简介 实验室分离的人肝实质细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化结合差速贴壁法，并通过专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的人肝实质细胞经特异性标志物免疫荧光鉴定，纯度可达85%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 人肝实质细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 多边形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
人肝实质细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：健康志愿者供体组织（经医院伦理委员会批准），每例取材获0.8-2.5×10⁶个细胞，活力>90%
试剂：0.1%胰蛋白酶、Ⅰ型/Ⅳ型胶原酶混合液、DNase I、BSA、DMEM高糖培养基
分离纯化步骤
组织块经Hanks液反复冲洗后剪碎，加入0.1%胰蛋白酶、Ⅰ型/Ⅳ型胶原酶混合液、DNase I、BSA于37℃水浴消化40-60分钟，期间间歇振荡
消化液经100目不锈钢滤网过滤，收集滤液，4℃、600g离心8分钟收集细胞沉淀
细胞沉淀重悬于含10% FBS的培养基中，经Ficoll密度梯度离心（600g，8分钟）纯化目标细胞
原代培养要点
细胞重悬于完全培养基中，按5×10⁴密度接种，置于37℃、5% CO₂恒温培养箱
细胞贴壁后呈典型形态，生长速率适中，每3-5天传代一次，传代后活力保持良好
常见问题优化
细胞形态异常：检查培养基pH值和渗透压，避免过度传代导致细胞老化
细胞活力差：严格控制消化时间，除消化步骤外全程冰上操作，使用新鲜配制试剂
纯度不达标：优化密度梯度离心条件，延长免疫磁珠孵育时间，增加洗涤步骤
大鼠磷酸化的核转录因子(pNF-KB)elisa试剂盒 | HT115结肠癌 |
大鼠磷酸化雷帕霉素靶蛋白(pmTOR)elisa试剂盒 | 猪脂肪干细胞 |
大鼠磷酸化混合谱系激酶域样蛋白(p-MLKL)elisa试剂盒 | 兔脐带血间充质干细胞 |
大鼠质膜钙泵2(PMCA2)elisa试剂盒 | 人肾足突细胞 |
大鼠串珠素(HSPG2)elisa试剂盒 | 人子宫颈表皮癌细胞ME-180(STR鉴定正确) |
大鼠垂体腺苷酸环化酶激活肽38(PACAP38)elisa试剂盒 | 大鼠肾上皮细胞 |
猪二胺氧化酶（DAO）elisa试剂盒 | 猪原代甲状腺上皮细胞 |
RWPE-1人前列腺正常细胞专用培养基 | HAL基因过表达细胞株 |
H9C2大鼠心肌细胞专用培养基 | ZNF470基因过表达细胞株 |
猪原代肾小球系膜细胞专用培养基 | ZNF148基因过表达细胞株 |
GT1-1细胞专用培养基 | KLHL1基因过表达细胞株 |
大鼠原代子宫微血管内皮细胞专用培养基 | DRD1基因过表达细胞株 |
人肝实质细胞大鼠原代卵巢颗粒细胞专用培养基 | CTNS基因过表达细胞株 |
HBE135-E6E7细胞专用培养基 | CRTAC1基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 手术器械（剪刀、镊子、止血钳）及培养耗材经121℃高压灭菌20min；超净台紫外照射30min。
2. 配制冰预冷PBS缓冲液、Ⅳ型胶原酶+卵白素蛋白酶混合消化液、DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗、胎牛血清、双抗，全部冰浴预冷。
3. 人源组织样本（临床手术废弃组织）处理。
二、取材与预处理
1. 经伦理委员会批准获取，体表酒精消毒，暴露目标组织器官。
2. 无菌条件下摘取肝组织，冰预冷PBS缓冲液漂洗去除血液及杂质，去除周围结缔组织和脂肪。
3. 眼科剪将组织剪碎至1mm³小块，转入离心管。
三、细胞分离与消化
1. 剪碎组织加入Ⅳ型胶原酶消化液，37℃水浴消化36min，期间每隔5-10min振荡吹打。
2. 用含血清培养基终止反应，经200目筛网过滤获取单细胞悬液。
3. 4℃、200g离心10min，弃上清，PBS洗涤两次，重悬细胞沉淀。
四、纯化与接种培养
1. 细胞悬液经40μm滤膜过滤，采用适当纯化方法去除杂质细胞，去除大颗粒杂质。
2. 用DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗重悬细胞沉淀，调整接种密度后接种至明胶预包被的培养器皿。
3. 37℃、5% CO2培养，每2-3天换液一次，定期倒置显微镜观察形态因细胞类型而异，贴壁或悬浮生长及生长情况。
