内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA试剂盒

内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA试剂盒

1、血清：室温血液自然凝固10-20分钟，2000-3000转/分离心20分钟收集上清。

2、血浆：用EDTA或柠檬酸钠抗凝，混匀10-20分钟后2000-3000转/分离心20分钟取上清。

3、组织标本：称重后加pH7.4的PBS匀浆，液氮速冻后融化，2000-3000转/分离心20分钟取上清。

4、样本采集后24小时内完成检测，暂不检测可分装-20℃冻存，避免反复冻融。

操作步骤：

1、所有试剂提前从冰箱取出，平衡至室温后再使用，浓洗涤液盐析出时可37℃水浴助溶稀释。

2、设置标准品孔、待测样本孔，每孔分别加入梯度标准品或处理好的待测样本100μL，37℃孵育90分钟。

3、弃去孔内液体，不用洗涤，直接加入新鲜稀释的生物素化抗体工作液100μL，37℃孵育60分钟。

4、弃去液体后洗板3次，每次浸泡1-2分钟，拍干后加入酶结合物工作液100μL，37℃避光孵育30分钟。

5、弃去液体后洗板5次，每孔加入底物溶液90μL，37℃避光孵育10-20分钟，可见孔内出现蓝色梯度。

6、每孔快速加入终止液50μL，颜色由蓝立即转为黄色，15分钟内用酶标仪在450nm波长读取OD值。

试剂盒预先包被内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)捕获抗体的微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤后，用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化为蓝色，在酸的作用下最终转化为黄色，颜色深浅与样本中Endothelial nitric oxide synthase,eNOS的含量呈正相关。

样本要求：应避免使用溶血或高血脂的标本，标本中的悬浮物应通过离心去除。待测样本应尽早检测，如需保存，应在-20℃或-80℃冷冻，并避免反复冻融。

试剂准备：使用前需将所有试剂置于室温平衡约30分钟。浓缩洗涤液若有晶体析出，需在37℃下加热至完全溶解后再稀释使用。

操作规范：

为避免交叉污染，添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。

显色剂（TMB）应避免光照，从无色变为蓝色为正常现象。

洗板步骤对结果准确性至关重要，无论是手动还是自动洗板，都应确保洗涤充分。

安全提示：试剂盒中的终止液（稀硫酸）具有腐蚀性，显色剂和某些成分可能引起皮肤或呼吸道刺激，操作时应佩戴防护手套、眼镜等，并在处理后彻底洗手。