产品名称 | 猪脂肪细胞 | 组织来源 | 腹部腹股沟皮下白色脂肪 |
英文名称 | Porcine Adipocytes | 种属 | 小香猪 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2687 |
方法简介 实验室分离的猪脂肪细胞采用胶原酶-胰酶联合消化法获得前脂肪细胞，经成脂诱导培养基诱导培养制备而来。
质量检测 实验室分离的猪脂肪细胞经油红O定性检测阳性，成脂染色数占比>60%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）
培养基： 猪脂肪细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 梭形、多角形、圆形
传代比例： 不传代
传代特性： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群
消化液： 0.25%胰蛋白酶
猪脂肪细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：清洁级猪，取皮下脂肪或棕色脂肪组织
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12培养基、FBS、PBS、IBMX、地塞米松、胰岛素
分离纯化步骤
取实验动物脂肪组织，剪碎后加入II型胶原酶(1mg/mL)37度振荡消化1-2小时
消化液经70um滤网过滤，100g离心10分钟收集沉渣(含前脂肪细胞和脂肪细胞)
去除上层脂肪层，将沉渣重悬于PBS中，再次离心纯化
沉淀细胞接种于培养皿中，贴壁细胞即为前脂肪细胞/脂肪间充质干细胞
原代培养要点
前脂肪细胞使用DMEM/F12+10%FBS培养基，37度、5% CO2培养
细胞呈梭形贴壁生长，融合达80-90%时传代
诱导分化：换用分化培养基(DMEM+10%FBS+0.5mM IBMX+1uM地塞米松+10ug/mL胰岛素)诱导48-72小时后换维持培养基
脂肪细胞培养7-14天后可观察到明显脂滴积累，Oil Red O染色阳性
常见问题优化
前脂肪细胞得率低：延长胶原酶消化时间至2小时，适当提高酶浓度
分化效率低：确保诱导培养基中各组分新鲜配制，IBMX需现用现配
细胞老化：控制传代次数在5代以内，早期代次分化潜能更佳
大鼠蛋白磷酸脂酶(PP2A)elisa试剂盒 | GP5d结肠癌 |
大鼠对氧磷酶1(PON1)elisa试剂盒 | 猪卵巢内膜细胞 |
大鼠对氧磷酶(PON)elisa试剂盒 | 兔胚胎成纤维细胞 |
大鼠过氧化物酶(POD)elisa试剂盒 | 小鼠心肌细胞 |
大鼠成纤维细胞生长因子2(FGF-2)elisa试剂盒 | 人宫颈癌细胞Hela (STR鉴定正确) |
大鼠成纤维细胞生长因子23(FGF-23)elisa试剂盒 | 人胆脂瘤细胞 |
猪芳香烃受体（AHR）elisa试剂盒 | 兔阴道黏膜上皮细胞 |
RKO人结肠腺癌细胞专用培养基 | AGGF1基因过表达细胞株 |
CTX-TNA2大鼠脑I型星形胶质细胞专用培养基 | CAPN7基因过表达细胞株 |
小鼠原代DRG神经元细胞专用培养基 | CABS1基因过表达细胞株 |
GL261+luc细胞专用培养基 | B3GNT9基因过表达细胞株 |
狗原代肠神经胶质细胞专用培养基 | BMPR1B基因过表达细胞株 |
猪脂肪细胞大鼠原代泪道上皮细胞专用培养基 | ACOT6基因过表达细胞株 |
H4-II-E-C3 细胞专用培养基 | ZNF16基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 解剖器械、离心管、滤网灭菌；超净台紫外消毒 30min。
2. 试剂：无菌 PBS 双抗液、0.1%Ⅰ 型胶原酶、DMEM 完全培养基、红细胞裂解液。
3. 冰盒放置预冷 PBS，提前分装培养基与消化液。
二、取材与预处理
1. 取猪皮下白色脂肪组织，酒精消毒表层，PBS 反复冲洗去除血迹与污物。
2. 仔细剔除血管、筋膜等非脂肪结缔组织，剪切成 1mm³ 脂肪组织碎块。
三、细胞分离与消化
1. 脂肪碎块按 1:3 比例加入胶原酶消化液，37℃水浴震荡消化 40min。
2. 培养基中和消化，充分吹打混匀，分层静置后吸取下层细胞悬液。
3. 离心 1200rpm 6min，弃上层漂浮脂肪油滴，沉淀裂解红细胞后再次离心洗涤。
四、纯化与接种培养
1. 细胞沉淀重悬过 200 目筛网，去除组织残渣。
2. 按适宜密度接种培养瓶，37℃培养箱培养。
3. 24h 换液除去漂浮脂滴与死细胞，每 2~3d 换液，诱导分化可加入分化诱导液。
