产品名称 | 猪脂肪间充质干细胞 | 组织来源 | 腹部腹股沟皮下白色脂肪 |
英文名称 | Porcine Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells | 种属 | 小香猪 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2681 |
方法简介 实验室分离的猪脂肪间充质干细胞采用胶原酶消化法制备而来。
质量检测 实验室分离的猪脂肪间充质干细胞经CD90免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 猪脂肪间充质干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
猪脂肪间充质干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：清洁级猪，取材需严格无菌操作
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、MSC专用培养基/干细胞专用培养基、FBS、beta-巯基乙醇、L-谷氨酰胺
分离纯化步骤
从实验动物目标组织(骨髓/脂肪/脐带/牙髓等)中分离间充质成分
组织剪碎后经胶原酶消化(37度、2小时)，过滤获取单细胞悬液
采用密度梯度离心(Ficoll)纯化单个核细胞层
将细胞接种于培养皿中，间充质干细胞24-48小时贴壁，非贴壁细胞换液去除
贴壁细胞扩大培养至60-70%融合后，流式分选CD90+/CD105+/CD34-/CD45-细胞
原代培养要点
干细胞培养需使用专用培养基(含20%FBS的MSC培养基或DMEM/F12+20%FBS)
接种密度建议5x10^3-1x10^4 cells/cm2，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，间充质干细胞呈梭形贴壁生长，融合达80%时传代
干细胞具有三系分化潜能，可在诱导培养基中向成骨/成脂/成软骨方向分化
常见问题优化
干细胞增殖缓慢：添加FGF-2(10ng/mL)和EGF(10ng/mL)可促进增殖
干细胞分化潜能下降：控制传代次数在3-5代以内，避免过度扩增
细胞纯度不高：采用流式分选CD90+/CD105+双阳性标记可提高纯度
大鼠磷酸化P38蛋白(p-P38)elisa试剂盒 | GP2d结肠癌 |
大鼠骨膜蛋白(POSTN)elisa试剂盒 | 猪乳腺成纤维细胞 |
大鼠对氧磷酶-1(PON1)elisa试剂盒 | 兔胎盘间充质干细胞 |
大鼠DNA指导聚合酶γ1(POLγ1)elisa试剂盒 | 人膀胱成纤维细胞 |
大鼠成纤维细胞生长因子19(FGF19)elisa试剂盒 | 人子宫颈表皮癌细胞MS751(STR鉴定正确) |
大鼠成纤维细胞生长因子21(FGF-21)elisa试剂盒 | 猪甲状腺上皮细胞 |
猪防御素（DF）elisa试剂盒 | 人原代乳腺癌相关成纤维细胞 |
RKO人结肠腺癌细胞专用培养基 | SETDB2基因过表达细胞株 |
CTX-TNA2大鼠脑I型星形胶质细胞专用培养基 | EEFSEC基因过表达细胞株 |
小鼠原代心肌成纤维细胞专用培养基 | HASPIN基因过表达细胞株 |
GIST-T1细胞专用培养基 | GLT1D1基因过表达细胞株 |
狗原代肠微血管内皮细胞专用培养基 | CDK20基因过表达细胞株 |
猪脂肪间充质干细胞大鼠原代口腔黏膜上皮细胞专用培养基 | ENPP7基因过表达细胞株 |
H22细胞专用培养基 | ZNF341基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 试剂：LG-DMEM、10% 胎牛血清、双抗、0.1%Ⅰ 型胶原酶、红细胞裂解液、PBS。
2. 耗材：无菌离心管、培养瓶、滤网，取猪皮下白色脂肪组织。
3. 器械高压灭菌，裂解液室温备用。
二、取材与预处理
1. 无菌摘取猪腹部皮下脂肪，去除血管、筋膜、血块，PBS 反复冲洗 5 次。
2. 脂肪组织剪碎至糊状（<1mm³），加入 PBS 吹打静置，弃下层液体，重复漂洗至无明显血色。
三、细胞分离与消化
1. 脂肪组织按 1:2 体积加入胶原酶，37℃水浴摇床消化 60min，充分解离脂肪基质血管组分。
2. 加入完全培养基终止消化，1000rpm 离心 10min，分层后弃上层漂浮脂肪。
3. 沉淀加入红细胞裂解液室温裂解 5min，离心弃上清，PBS 洗涤细胞沉淀。
四、纯化与接种培养
1. 完全培养基重悬细胞，接种培养瓶，37℃培养箱孵育。
2. 48h 首次全量换液，去除未贴壁血细胞与杂细胞，之后每 3 天换液。
3. 细胞长至 90% 汇合按 1:3 传代，流式 CD29/CD44/CD45 鉴定间充质干细胞表型。
