产品名称 | 猪前脂肪细胞 | 组织来源 | 腹部腹股沟皮下白色脂肪 |
英文名称 | Porcine Preadipocytes | 种属 | 小香猪 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2693 |
方法简介 实验室分离的猪前脂肪细胞采用胶原酶消化法制备而来。
质量检测 实验室分离的猪前脂肪细胞经成脂诱导功能验证，诱导成脂后，经油红O定性检测阳性，成脂染色数占比>60%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 猪前脂肪细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 梭形、多角形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3代左右
消化液： 0.25%胰蛋白酶
猪前脂肪细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：清洁级猪，取皮下脂肪或棕色脂肪组织
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12培养基、FBS、PBS、IBMX、地塞米松、胰岛素
分离纯化步骤
取实验动物脂肪组织，剪碎后加入II型胶原酶(1mg/mL)37度振荡消化1-2小时
消化液经70um滤网过滤，100g离心10分钟收集沉渣(含前脂肪细胞和脂肪细胞)
去除上层脂肪层，将沉渣重悬于PBS中，再次离心纯化
沉淀细胞接种于培养皿中，贴壁细胞即为前脂肪细胞/脂肪间充质干细胞
原代培养要点
前脂肪细胞使用DMEM/F12+10%FBS培养基，37度、5% CO2培养
细胞呈梭形贴壁生长，融合达80-90%时传代
诱导分化：换用分化培养基(DMEM+10%FBS+0.5mM IBMX+1uM地塞米松+10ug/mL胰岛素)诱导48-72小时后换维持培养基
脂肪细胞培养7-14天后可观察到明显脂滴积累，Oil Red O染色阳性
常见问题优化
前脂肪细胞得率低：延长胶原酶消化时间至2小时，适当提高酶浓度
分化效率低：确保诱导培养基中各组分新鲜配制，IBMX需现用现配
细胞老化：控制传代次数在5代以内，早期代次分化潜能更佳
大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)elisa试剂盒 | CW-2结肠癌 |
大鼠磷酸化P38蛋白(p-P38)elisa试剂盒 | 猪子宫内膜上皮细胞 |
大鼠蛋白磷酸酶(PP)elisa试剂盒 | 兔视网膜小胶质细胞 |
大鼠对氧磷酶-1(PON1)elisa试剂盒 | 大鼠输尿管上皮细胞 |
大鼠成骨相关转录因子抗体(OSX-Ab)elisa试剂盒 | 人结直肠癌细胞LS513(STR鉴定正确) |
大鼠成纤维细胞生长因子15(FGF-15)elisa试剂盒 | 人关节炎软骨细胞 |
猪肺表面活性物质相关蛋白A（SP-A）elisa试剂盒 | 兔原代DRG神经元细胞 |
RPMI8226人多发性骨髓瘤细胞专用培养基 | ZNF600基因过表达细胞株 |
CTX大鼠脑星形胶质细胞专用培养基 | ABHD13基因过表达细胞株 |
兔原代阴道真皮成纤维细胞专用培养基 | LIN54基因过表达细胞株 |
GES-1细胞专用培养基 | CPB1基因过表达细胞株 |
狗原代结肠黏膜上皮细胞专用培养基 | ELFN2基因过表达细胞株 |
猪前脂肪细胞大鼠原代颈静脉内皮细胞专用培养基 | FAM43A基因过表达细胞株 |
GT1-1细胞专用培养基 | IMPG1基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 解剖工具、离心耗材高压灭菌；超净台紫外消毒。
2. 试剂：PBS 双抗、Ⅰ 型胶原酶、DMEM 高糖培养基、红细胞裂解液。
3. 冰盒预冷缓冲液，提前分装培养基。
二、取材与预处理
1. 取猪腹部脂肪组织，酒精消毒表面，PBS 多次冲洗去除血污。
2. 剔除血管、筋膜，纯脂肪组织剪切成细小碎块。
三、细胞分离与消化
1. 胶原酶 37℃恒温震荡消化 45min。
2. 血清终止消化，静置分层，吸取下层细胞悬液。
3. 裂解红细胞后离心沉淀，PBS 洗涤两次。
四、纯化与接种培养
1. 200 目筛网过滤，去除组织团块。
2. 调整细胞密度接种培养瓶，37℃培养。
3. 24h 换液去除脂滴与漂浮杂质，扩增后可诱导成脂分化。
