产品名称 | 猪骨髓间充质干细胞 | 组织来源 | 骨髓 |
英文名称 | Porcine Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells | 种属 | 小香猪 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2711 |
方法简介 实验室分离的猪骨髓间充质干细胞采用冲洗骨髓、密度梯度离心、差速贴壁法结合培养基筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的猪骨髓间充质干细胞经CD90免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 猪骨髓间充质干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
猪骨髓间充质干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：清洁级猪，取材需严格无菌操作
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、MSC专用培养基/干细胞专用培养基、FBS、beta-巯基乙醇、L-谷氨酰胺
分离纯化步骤
从实验动物目标组织(骨髓/脂肪/脐带/牙髓等)中分离间充质成分
组织剪碎后经胶原酶消化(37度、2小时)，过滤获取单细胞悬液
采用密度梯度离心(Ficoll)纯化单个核细胞层
将细胞接种于培养皿中，间充质干细胞24-48小时贴壁，非贴壁细胞换液去除
贴壁细胞扩大培养至60-70%融合后，流式分选CD90+/CD105+/CD34-/CD45-细胞
原代培养要点
干细胞培养需使用专用培养基(含20%FBS的MSC培养基或DMEM/F12+20%FBS)
接种密度建议5x10^3-1x10^4 cells/cm2，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，间充质干细胞呈梭形贴壁生长，融合达80%时传代
干细胞具有三系分化潜能，可在诱导培养基中向成骨/成脂/成软骨方向分化
常见问题优化
干细胞增殖缓慢：添加FGF-2(10ng/mL)和EGF(10ng/mL)可促进增殖
干细胞分化潜能下降：控制传代次数在3-5代以内，避免过度扩增
细胞纯度不高：采用流式分选CD90+/CD105+双阳性标记可提高纯度
大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体β(PPAR-β)elisa试剂盒 | COLON 26结肠癌 |
大鼠磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-P38MAPK)elisa试剂盒 | 猪卵巢颗粒细胞 |
大鼠蛋白磷酸脂酶(PP2A)elisa试剂盒 | 兔视网膜神经节细胞 |
大鼠对氧磷酶1(PON1)elisa试剂盒 | 小鼠输尿管上皮细胞 |
大鼠成骨生长肽(OGP)elisa试剂盒 | 小鼠肝细胞AML12（种属鉴定） |
大鼠成纤维细胞生长因子(FGF)elisa试剂盒 | 鸡卵泡基膜细胞 |
猪肺表面活性物质相关蛋白B（SP-B）elisa试剂盒 | 大鼠原代胸腺上皮细胞 |
RL95-2人子宫内膜癌细胞专用培养基 | ADAM8基因过表达细胞株 |
CFSC-8B大鼠肝星形细胞专用培养基 | C10orf90基因过表达细胞株 |
大鼠原代肾足细胞专用培养基 | FBXO25基因过表达细胞株 |
GC-2spd(ts)细胞专用培养基 | CYLC1基因过表达细胞株 |
狗原代皮下微血管内皮细胞专用培养基 | ZNF287基因过表达细胞株 |
猪骨髓间充质干细胞大鼠原代颈动脉平滑肌细胞专用培养基 | CRTAC1基因过表达细胞株 |
GS-HEPG2细胞专用培养基 | FAM171B基因过表达细胞株 |
复苏前全套准备工作：37℃水浴预热猪骨髓间充质干细胞完全培养基，准备无菌离心管、培养瓶、PBS 缓冲液、胰酶消化液，超净台紫外消毒半小时，核对冻存干细胞标签；原代干细胞易分化，确认培养基组分完好无变质，细胞培养箱运行稳定。
冻存干细胞水浴解冻：取出液氮冻存管，快速投入 37℃水浴，轻柔晃动冻存管，1‑2min 融化冻存液，留存少量冰晶，75% 酒精擦拭冻存管外壁，带入超净台，尽量缩短室温暴露时长，降低干细胞凋亡、异常分化。
稀释离心去除冻存保护剂：将细胞悬液缓慢滴加到含有预温完全培养基的 15mL 离心管，轻柔吹打混匀，850r/min 离心 6min，离心完毕，小心弃除上清液，彻底去除 DMSO 冻存保护剂，不要扰动底部细胞沉淀。
重悬制备单细胞悬液接种：加入猪骨髓间充质干细胞完全培养基，轻柔吹打管底细胞沉淀，制备均匀单细胞悬液，计数后按照推荐密度接种 T25 培养瓶，十字摇匀，细胞均匀铺于瓶底。
培养箱恒温静置孵育：放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱孵育，48h 内不移动培养瓶，给骨髓间充质干细胞充足贴壁时间，维持细胞干性。
换液和干细胞状态监测：复苏 24‑48h 后更换预热新鲜培养基，去除悬浮死亡细胞；每 2‑3 天换液，显微镜观察长梭形干细胞形态，留意细胞是否出现形态异常分化，排查细菌真菌污染。
传代消化收获细胞：细胞汇合 75‑85% 开展传代，弃培养基，PBS 清洗瓶壁，胰酶消化，镜下细胞收缩离散变圆，完全培养基终止消化，收集细胞离心重悬分瓶扩增；严格控制传代次数，高代干细胞增殖、分化能力下降，优先选用低代细胞开展诱导实验。
