产品名称 | 小鼠棕色脂肪细胞 | 组织来源 | 脂肪组织 |
英文名称 | Mouse Brown Adipocytes | 种属 | 昆明小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3311 |
方法简介 实验室分离的小鼠棕色脂肪细胞采用胶原酶-胰酶联合消化法获得前脂肪细胞，经成脂诱导培养基诱导培养制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠棕色脂肪细胞经油红O定性检测阳性，成脂染色数占比>60%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）
培养基： 小鼠棕色脂肪细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 梭形、多角形、圆形
传代比例： 不传代
传代特性： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠棕色脂肪细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：C57BL/6小鼠，取皮下脂肪或棕色脂肪组织
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12培养基、FBS、PBS、IBMX、地塞米松、胰岛素
分离纯化步骤
取实验动物脂肪组织，剪碎后加入II型胶原酶(1mg/mL)37度振荡消化1-2小时
消化液经70um滤网过滤，100g离心10分钟收集沉渣(含前脂肪细胞和脂肪细胞)
去除上层脂肪层，将沉渣重悬于PBS中，再次离心纯化
沉淀细胞接种于培养皿中，贴壁细胞即为前脂肪细胞/脂肪间充质干细胞
原代培养要点
前脂肪细胞使用DMEM/F12+10%FBS培养基，37度、5% CO2培养
细胞呈梭形贴壁生长，融合达80-90%时传代
诱导分化：换用分化培养基(DMEM+10%FBS+0.5mM IBMX+1uM地塞米松+10ug/mL胰岛素)诱导48-72小时后换维持培养基
脂肪细胞培养7-14天后可观察到明显脂滴积累，Oil Red O染色阳性
常见问题优化
前脂肪细胞得率低：延长胶原酶消化时间至2小时，适当提高酶浓度
分化效率低：确保诱导培养基中各组分新鲜配制，IBMX需现用现配
细胞老化：控制传代次数在5代以内，早期代次分化潜能更佳
大鼠磷酸核糖焦磷酸酶(PPAT)elisa试剂盒 | U251 MG/TMZ+LUC(3000)人类星形胶质瘤耐替莫唑胺细胞荧光素酶标记 |
大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)elisa试剂盒 | 小鼠肾集合管上皮细胞 |
大鼠磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-P38MAPK)elisa试剂盒 | 小鼠肠间质细胞 |
大鼠蛋白磷酸酶(PP)elisa试剂盒 | C8-D1A (小鼠小脑组织细胞)(种属鉴定正确) |
大鼠沉默调节蛋白3(SIRT3)elisa试剂盒 | 小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞Beta-TC-6（种属鉴定） |
大鼠成骨生长肽(OGP)elisa试剂盒 | 大鼠脉络丛上皮细胞 |
猪肺表面活性物质相关蛋白D（SP-D）elisa试剂盒 | 兔原代子宫平滑肌细胞 |
REH人急性非B非T淋巴白血病细胞专用培养基 | GATAD2B基因过表达细胞株 |
CBRH7919大鼠肝癌细胞专用培养基 | ZNF148基因过表达细胞株 |
兔原代结膜成纤维细胞专用培养基 | CLEC14A基因过表达细胞株 |
GBC-SD细胞专用培养基 | CHN2基因过表达细胞株 |
狗原代气管上皮细胞专用培养基 | CTNS基因过表达细胞株 |
小鼠棕色脂肪细胞大鼠原代颈动脉成纤维细胞专用培养基 | SV2C基因过表达细胞株 |
GM12878细胞专用培养基 | CNBD2基因过表达细胞株 |
复苏实验前期筹备：37℃水浴预热棕色脂肪细胞完全培养基，准备无菌离心管、培养瓶、PBS 缓冲液、低浓度胰酶消化液，超净台紫外灭菌；成熟棕色脂肪细胞内含脂滴，细胞较为脆弱，核对冻存管标签，仔细检查全部试剂无浑浊污染。
冻存细胞水浴快速融化：取出液氮冻存管，投入 37℃水浴轻柔晃动，1min‑1.5min 融化冻存液，留有微量冰晶，75% 酒精擦拭冻存管外壁，带入超净台，严格控制室温暴露时长，脂滴细胞极易受温度变化损伤。
稀释离心去除 DMSO 保护剂：将细胞悬液缓慢滴入装有预温完全培养基的 15mL 离心管，轻柔颠倒混匀，降低吹打力度，800r/min 离心 6min，离心结束，小心弃除上清液，充分去除冻存保护剂，操作轻柔避免脂滴破裂。
温和重悬细胞接种铺瓶：加入棕色脂肪细胞完全培养基，极轻柔吹打细胞沉淀，禁止剧烈吹打造成脂滴破裂细胞死亡，制备单细胞悬液，计数后低密度接种 T25 培养瓶，缓慢十字摇匀培养瓶。
培养箱静置孵育贴壁：平稳放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育，48h 之内禁止挪动培养瓶，成熟棕色脂肪细胞贴壁能力弱，需要极其稳定培养环境。
换液操作与细胞观察：复苏 48h 后轻柔换液，缓慢吸弃旧培养基，避免吸走贴壁不牢的脂肪细胞，加入预热新鲜培养基；每 2‑3 天换液，显微镜观察胞内多房脂滴的棕色脂肪细胞特征，监控细胞漂浮死亡情况。
实验收获处理：该细胞增殖能力极弱，不适合多次传代；细胞状态稳定后直接用于后续实验；如需收集细胞，使用低浓度胰酶短时间消化，及时终止消化，低速离心收集细胞，避免脂滴破裂，不建议反复传代扩增。
