小鼠棕色脂肪干细胞

小鼠棕色脂肪干细胞

采用组织块贴壁法从C57BL/6小鼠的棕色脂肪干细胞来源组织（骨髓/脐带/脂肪等）中分离间充质成分，经密度梯度离心纯化单核细胞后，接种于未包被培养皿中，使用 α-MEM 培养基（含 10% FBS、100 U/mL 青霉素和 100 μg/mL 链霉素）培养；通过流式细胞术检测干细胞标志物 CD90、CD44、CD105、STRO-1 表达，结合三系分化能力验证（成骨诱导 ALP 阳性/阿利新蓝染色、成脂诱导 Oil Red O 染色、成软骨诱导 Alcian Blue 染色）确认干细胞多能性。

产品名称：小鼠棕色脂肪干细胞

英文名称： Mouse Brown Adipose-Derived Stem Cells

组织来源： 脂肪组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠棕色脂肪干细胞采用胶原酶消化法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠棕色脂肪干细胞经CD29或CD44免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠棕色脂肪干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠棕色脂肪干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

复苏前期准备工作：37℃水浴预热棕色脂肪干细胞完全培养基，准备无菌离心管、培养瓶、PBS 缓冲液、胰酶消化液，超净台紫外消毒半小时，核对冻存干细胞标签；干细胞容易自发分化，确认培养基无变质污染，培养箱参数稳定。

冻存干细胞水浴解冻：取出液氮冻存管，快速置于 37℃水浴，轻柔晃动冻存管，1‑1.5min 融化冻存液，留存少量冰晶，75% 酒精擦拭管外壁，移入超净工作台，最大限度缩短室温暴露，减少干细胞凋亡与异常分化。

稀释离心去除冻存保护剂：将细胞悬液缓慢滴加到含有预温完全培养基的 15mL 离心管，轻柔混匀，850r/min 离心 5min，离心完毕，小心弃除上清，DMSO 会诱导干细胞分化，上清尽量去除干净，不触碰底部细胞沉淀。

重悬制备单细胞悬液接种：加入棕色脂肪干细胞完全培养基，轻柔吹打沉淀，制备均匀单细胞悬液，计数后按照推荐密度接种 T25 培养瓶，十字摇匀，细胞均匀铺于瓶底。

培养箱恒温静置孵育：放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱孵育，48h 内不移动培养瓶，给干细胞充足贴壁时间，维持干细胞原始状态。

换液和干细胞状态监测：复苏 24h 后更换新鲜预热培养基，清除悬浮死亡细胞；每 2‑3 天换液，显微镜观察干细胞成纤维样形态，留意是否出现自发脂滴分化，严格排查微生物污染。

传代消化收获细胞：细胞汇合 70‑80% 开展传代，弃培养基，PBS 清洗瓶壁，胰酶消化，镜下细胞离散收缩变圆，完全培养基终止消化，收集细胞离心重悬分瓶扩增；控制传代次数，高代干细胞干性下降，不建议用于诱导分化实验。

1.操作过程中需严格无菌操作，任何微生物污染都会导致细胞死亡或实验结果偏差。

2.培养器皿需提前用0.1mg/ml多聚赖氨酸包被过夜，未包被的培养板细胞贴壁效率极低。

3.部分细胞类型需要特定的细胞外基质包被才能正常贴壁和发挥功能，需提前优化条件。

4.添加5ng/ml转化生长因子-beta(TGF-beta)以调节细胞表型和功能维持。

5.传代时用PBS轻柔洗涤2次后加入0.25%胰蛋白酶，室温作用2-3分钟收集细胞。