小鼠棕色前脂肪细胞

小鼠棕色前脂肪细胞

运用密度梯度离心法从C57BL/6小鼠脂肪组织中分离成熟脂肪细胞和前脂肪细胞，经胶原酶消化后取浮层脂肪细胞和沉淀前脂肪细胞分别培养，前脂肪细胞使用 DMEM/F12 完全培养基（含 20% FBS）扩增，分化诱导使用含 0.5 mM IBMX、1 μM Dexamethasone、5 μg/mL Insulin 和 500 μM RO201724 的成脂诱导培养基处理 7-10 天；通过 Oil Red O 脂滴染色定量脂滴面积，Western blot 分析 PPARγ、aP2、Adipsin 表达水平

产品名称：小鼠棕色前脂肪细胞

英文名称： Mouse Brown Preadipocytes

组织来源： 脂肪组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠棕色前脂肪细胞采用胶原酶消化法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠棕色前脂肪细胞经成脂诱导功能验证，诱导成脂后，经油红O定性检测阳性，成脂染色数占比>60%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠棕色前脂肪细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠棕色前脂肪细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

复苏前全套准备：37℃水浴预热棕色前脂肪细胞专用完全培养基，准备无菌离心管、培养瓶、PBS 缓冲液、胰酶消化液，超净台紫外灭菌 30min，核对冻存管标签；前脂肪细胞对培养条件敏感，确认培养基组分完好，无浑浊污染，调试培养箱。

冻存细胞水浴解冻：取出液氮冻存管，快速投入 37℃水浴，轻柔晃动冻存管，1‑1.5min 融化冻存液，仅剩微小冰晶，75% 酒精擦拭冻存管外壁，带入超净台，缩短室温暴露时间，降低细胞凋亡风险。

稀释离心去除 DMSO：将细胞悬液缓慢滴入装有预温完全培养基的 15mL 离心管，轻柔吹打混匀，800r/min 离心 6min，离心结束，小心弃除上清液，冻存保护剂去除干净，保护底部细胞沉淀。

重悬细胞接种铺瓶：加入棕色前脂肪细胞完全培养基，温和吹打细胞沉淀，制备单细胞悬液，计数后按照标准密度接种 T25 培养瓶，十字摇晃培养瓶，细胞均匀分布瓶底。

培养箱静置孵育贴壁：放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育，24‑48h 不要挪动培养瓶，前脂肪细胞需要稳定环境完成贴壁。

换液与细胞状态观察：复苏 24h 后首次换液，吸弃旧培养基，去除悬浮死亡细胞，加入预热新鲜培养基；每 2‑3 天换液，显微镜观察梭形前脂肪细胞形态，注意不要诱导提前脂滴分化，监控污染。

传代消化收集细胞：细胞汇合 70‑75% 进行传代，弃培养基，PBS 洗涤，胰酶消化，镜下细胞收缩变圆，完全培养基终止消化，收集细胞离心重悬分瓶；未诱导分化前及时传代，细胞汇合过高会自发出现脂滴，影响实验。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.培养板需预先用胶原I型(50ug/ml)包被过夜，以增强细胞贴壁能力。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.补充10ug/ml胰岛素、5ug/ml转铁蛋白和2nM三碘甲腺原氨酸(T3)。

5.该细胞传代比例为1:2至1:3，每3-4天换液一次，避免过度融合影响细胞状态。