产品名称 | 小鼠子宫颈上皮细胞 | 组织来源 | 子宫组织 |
英文名称 | Mouse Cervical Epithelial Cells | 种属 | 昆明小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2882 |
方法简介 实验室分离的小鼠子宫颈上皮细胞采用胶原酶消化法，结合上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠子宫颈上皮细胞经Cytokeratin-19免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 小鼠子宫颈上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠子宫颈上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：C57BL/6小鼠，组织取材量充足，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质，剪碎至1mm3大小
加入0.25%胰蛋白酶和II型胶原酶混合消化液，37度消化30-40分钟，期间振荡2-3次
消化完成后加入含20%胎牛血清的完全培养基终止消化，用移液器反复吹打分散
依次过70um、40um细胞滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
用完全培养基重悬细胞，计数并检测活力，调整细胞密度后进行接种
原代培养要点
调整细胞密度至5x10^4-1x10^5 cells/cm2接种于胶原包被培养皿，37度、5% CO2培养
上皮细胞贴壁较慢，通常需24-48小时方可观察到贴壁细胞，建议48小时首次换液
培养基每2-3天更换一次，使用含10% FBS的DMEM/F12完全培养基
细胞融合达80-90%时可进行传代，建议采用温和的胰蛋白酶-EDTA(0.05%)消化传代
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用多聚赖氨酸或胶原预包被培养皿表面，可显著提高贴壁效率
上皮细胞生长缓慢：培养基中添加0.1mM IBMX和5ug/mL胰岛素，可促进上皮细胞增殖
交叉污染：严格无菌操作，培养基中添加双抗(100U/mL青霉素+100ug/mL链霉素)
大鼠肾素活性(PRA)elisa试剂盒 | T47D人乳腺导管癌细胞 |
大鼠孕激素受体(PR)elisa试剂盒 | 小鼠腹膜间皮细胞 |
大鼠磷酸化蛋白激酶A(P-PKA)elisa试剂盒 | 小鼠胃平滑肌细胞 |
大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)elisa试剂盒 | MPC-11 (小鼠浆细胞瘤) |
大鼠超氧化物歧化酶1(SOD1)elisa试剂盒 | 人食管癌细胞TE-1(STR鉴定正确) |
大鼠超氧阴离子自由基(·O2)elisa试剂盒 | 小鼠肝间质细胞 |
猪分泌型免疫球蛋白M（sIgM）elisa试剂盒 | 小鼠原代脑微血管周细胞 |
RBE人肝胆管癌细胞专用培养基 | SLC28A3基因过表达细胞株 |
C6大鼠脑胶质瘤细胞专用培养基 | CABS1基因过表达细胞株 |
小鼠原代冠状动脉内皮细胞专用培养基 | HCRTR2基因过表达细胞株 |
FRhK-4细胞专用培养基 | CDK20基因过表达细胞株 |
鸡气管黏膜上皮细胞永生化细胞专用培养基 | ACOT6基因过表达细胞株 |
小鼠子宫颈上皮细胞大鼠原代结膜成纤维细胞专用培养基 | HAL基因过表达细胞株 |
GES-1细胞专用培养基 | ADAM8基因过表达细胞株 |
复苏前期准备工作：37℃水浴预热宫颈上皮细胞专用完全培养基，准备无菌离心管、培养瓶、PBS 缓冲液、低浓度胰酶消化液，超净台紫外消毒半小时，核对冻存细胞标签；上皮细胞比较脆弱，确认试剂无微生物污染，检查培养箱 CO₂、温度参数。
冻存细胞水浴快速融化：取出液氮冻存管，投入 37℃水浴轻柔晃动，1‑1.5min 融化冻存液，留存少量冰晶即可，75% 酒精擦拭冻存管外壁，带入超净台，尽量缩短细胞室温暴露时长，降低细胞凋亡。
稀释离心去除冻存保护剂：将细胞悬液缓慢滴加到含有预温完全培养基的 15mL 离心管，轻柔吹打混匀，900r/min 离心 6min，离心完毕，小心弃除上清液，DMSO 对上皮细胞毒性较强，上清尽量去除干净，不触碰底部细胞沉淀。
温和重悬细胞接种铺瓶：加入宫颈上皮细胞完全培养基，轻柔低速吹打沉淀，禁止大力吹打损伤细胞膜，制备单细胞悬液，计数后按照推荐密度接种 T25 培养瓶，十字摇匀，细胞均匀铺于瓶底。
培养箱静置孵育贴壁：放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育，48h 内不移动培养瓶，宫颈上皮细胞贴壁速度偏慢，需要充足时间完成贴壁伸展。
换液操作和细胞状态监测：复苏 48h 后首次换液，吸弃旧培养基，PBS 轻柔漂洗，加入预热新鲜培养基，去除悬浮死亡细胞；每 2‑3 天换液，显微镜观察多边形上皮细胞形态，警惕成纤维细胞混杂污染。
传代消化收获细胞：细胞汇合 70‑75% 进行传代，弃培养基，PBS 清洗瓶壁，温和胰酶消化，镜下细胞皱缩变圆，立刻完全培养基终止消化，收集细胞离心重悬分瓶；上皮细胞传代次数有限，优先使用低代细胞开展实验。
