小鼠子宫成纤维细胞

小鼠子宫成纤维细胞

采用组织块贴壁法从C57BL/6小鼠的子宫成纤维细胞来源组织中分离成纤维细胞，经 0.25% 胰蛋白酶消化传代后，接种于未包被培养皿中，使用 DMEM 低糖培养基（含 10% FBS、100 U/mL 青霉素和 100 μg/mL 链霉素）培养；通过免疫荧光染色检测成纤维细胞标志物 CD90（Thy-1）、CD44、vimentin 及 FSP-1 表达，结合细胞形态学观察（梭形、长突起 morphology）和碱性磷酸酶（ALP）活性检测确认细胞身份。

产品名称：小鼠子宫成纤维细胞

英文名称： Mouse Uterine Fibroblasts

组织来源： 子宫组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠子宫成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠子宫成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠子宫成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠子宫成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

复苏前试剂耗材筹备：37℃水浴预热子宫成纤维细胞完全培养基，准备无菌离心管、T25 培养瓶、PBS 缓冲液、胰酶‑EDTA 消化液，超净台紫外灭菌 30min，核对冻存管标签，检查所有试剂无浑浊沉淀，确认细胞培养箱运行正常。

冻存细胞水浴解冻操作：从液氮罐取出冻存管，快速放入 37℃水浴，持续轻柔晃动冻存管，1‑2min 完成冻存液融化，仅剩微小冰晶，取出冻存管，75% 酒精擦拭外壁，移入超净工作台，缩短室温暴露时间。

稀释离心去除 DMSO 冻存保护剂：将管内细胞悬液缓慢滴加到装有预温完全培养基的 15mL 离心管，轻柔吹打混匀，850r/min 离心 5min，离心结束，小心弃去上层上清，充分去除 DMSO，保护底部细胞沉淀。

重悬单细胞悬液接种铺瓶：加入子宫成纤维细胞完全培养基，温和吹打细胞沉淀，制备均匀单细胞悬液，细胞计数后按照标准密度接种 T25 培养瓶，十字摇晃培养瓶，使细胞均匀分布瓶底。

培养箱静置孵育贴壁：平稳放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育，24h 内减少挪动培养瓶，成纤维细胞贴壁较快，稳定环境利于细胞伸展生长。

换液处理以及细胞观察：复苏 24h 后进行首次换液，吸弃旧培养基，清除悬浮死亡细胞，加入预热新鲜培养基；每 2‑3 天更换培养基，显微镜观察典型长梭形成纤维细胞形态，监控污染情况。

传代消化收集细胞：细胞汇合 75‑85% 开展传代，弃旧培养基，PBS 洗涤细胞，加入胰酶消化，镜下细胞收缩变圆，立刻加入完全培养基终止消化，收集细胞悬液离心，重悬分瓶扩增；该细胞增殖快，及时传代，防止细胞老化。

1.操作过程中需严格无菌操作，任何微生物污染都会导致细胞死亡或实验结果偏差。

2.培养板需预先用胶原I型(50ug/ml)包被过夜，以增强细胞贴壁能力。

3.该细胞对培养条件较为敏感，建议初次培养时设置多个平行实验以提高成功率。

4.培养基中需加入1%胰岛素转铁蛋白硒(ITS)补充剂和10nM地塞米松。

5.建议传代比例为1:2，每2-3天更换新鲜培养基，维持细胞最佳生长状态。