小鼠滋养层干细胞

小鼠滋养层干细胞

基于胶原酶消化-密度梯度离心联合策略从C57BL/6小鼠滋养层干细胞组织获取干细胞组分，经差速贴壁纯化后接种于明胶包被培养皿中，使用含多种生长因子（bFGF 10 ng/mL、EGF 20 ng/mL 及 PDGF）的干细胞专用培养基培养；通过 RT-qPCR 检测 Oct4、Nanog、Sox2、KLF4 等多能性基因转录水平，免疫荧光显示 SSEA-1/TRA-1-60 抗原表达，并结合 colony-forming unit assay 评估克隆形成能力。

产品名称：小鼠滋养层干细胞

英文名称： Mouse Trophoblast Stem Cells

组织来源： 胎盘组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠滋养层干细胞采用囊胚组织贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠滋养层干细胞经HLA-E（白细胞抗原）免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠滋养层干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠滋养层干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

复苏前期准备工作：37℃水浴预热滋养层干细胞专用完全培养基，准备无菌离心管、培养瓶、PBS、胰酶消化液，超净台紫外消毒，核对冻存细胞标签；干细胞对培养条件敏感，确认培养基细胞因子组分完好，无变质污染，调试培养箱参数。

冻存干细胞水浴快速解冻：取出液氮冻存管，快速置于 37℃水浴，轻柔晃动冻存管，1min‑1.5min 融化冻存液，留有微量冰晶，75% 酒精擦拭管外壁，移入超净台，最大限度缩短室温暴露，减少干细胞凋亡分化。

稀释离心去除冻存保护剂：将细胞悬液缓慢滴入预加完全培养基的 15mL 离心管，轻柔混匀，800r/min 离心 5min，离心结束，小心弃去上清液，DMSO 容易诱导干细胞异常分化，上清去除彻底，不扰动底部细胞沉淀。

重悬制备悬液接种细胞：加入滋养层干细胞完全培养基，轻柔吹打沉淀，制备单细胞悬液，计数后按照推荐密度接种培养瓶，十字摇匀，细胞均匀铺在瓶底，避免局部细胞聚集。

培养箱恒温静置孵育：放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱孵育，24‑48h 不要移动培养瓶，给干细胞充足贴壁时间，维持干细胞未分化状态。

换液、干细胞状态监控：复苏 24h 后更换新鲜预热培养基，去除悬浮死亡细胞；每日或者隔天换液，显微镜观察干细胞克隆形态，观察细胞是否出现自发分化，严格排查细菌真菌污染。

传代消化以及细胞收获：细胞克隆生长适宜密度时开展传代，弃培养基，PBS 清洗，胰酶消化，镜下细胞离散，完全培养基终止消化，收集细胞离心重悬分瓶扩增；严格控制传代次数，密切观察分化迹象，一旦大量分化不再用于实验。

1.操作过程需保持低温环境，室温下长时间暴露会导致细胞活力显著下降。

2.培养板需预先用胶原I型(50ug/ml)包被过夜，以增强细胞贴壁能力。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.添加5ng/ml转化生长因子-beta(TGF-beta)以调节细胞表型和功能维持。

5.建议传代比例为1:2，每2-3天更换新鲜培养基，维持细胞最佳生长状态。