小鼠主动脉外膜成纤维细胞

小鼠主动脉外膜成纤维细胞

采用组织块贴壁法从C57BL/6小鼠的主动脉外膜成纤维细胞来源组织中分离成纤维细胞，经 0.25% 胰蛋白酶消化传代后，接种于未包被培养皿中，使用 DMEM 低糖培养基（含 10% FBS、100 U/mL 青霉素和 100 μg/mL 链霉素）培养；通过免疫荧光染色检测成纤维细胞标志物 CD90（Thy-1）、CD44、vimentin 及 FSP-1 表达，结合细胞形态学观察（梭形、长突起 morphology）和碱性磷酸酶（ALP）活性检测确认细胞身份。

产品名称：小鼠主动脉外膜成纤维细胞

英文名称： Mouse Aortic Adventitial Fibroblasts

组织来源： 主动脉组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠主动脉外膜成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠主动脉外膜成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠主动脉外膜成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠主动脉外膜成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

复苏前全套准备工作：37℃水浴预热成纤维细胞完全培养基，准备无菌离心管、培养瓶、PBS、胰酶消化液，超净台紫外灭菌半小时，核对冻存管信息，检查试剂无变质浑浊，确认细胞培养箱温度、二氧化碳浓度正常。

冻存细胞水浴解冻操作：从液氮罐取出冻存管，快速放入 37℃水浴，轻柔晃动冻存管加速融化，1‑2min 完成解冻，仅剩微小冰晶，取出后 75% 酒精擦拭管外壁，移入超净工作台，缩短室温暴露时间。

稀释离心去除 DMSO：将冻存管内细胞悬液缓慢滴入装有预温完全培养基的 15mL 离心管，轻柔吹打混匀，800r/min 离心 6min，离心结束，小心弃去上清液，充分去除冻存保护剂，保护底部细胞沉淀。

重悬单细胞悬液接种：加入成纤维细胞完全培养基，轻柔吹打管底细胞沉淀，制备均匀单细胞悬液，计数后按标准密度接种至 T25 培养瓶，十字摇匀培养瓶，使细胞均匀铺于瓶底。

培养箱静置孵育贴壁：将培养瓶平稳放入 37℃、5% CO₂培养箱静置孵育，24h 内减少挪动，成纤维细胞贴壁较快，稳定环境利于细胞伸展。

换液与细胞形态观察：复苏 24h 后进行换液，吸除旧培养基，去除悬浮死细胞，加入新鲜预热培养基；每 2‑3 天换液，显微镜观察长梭形成纤维细胞形态，监控细菌、真菌污染情况。

传代消化收集细胞：细胞汇合 75‑85% 进行传代，弃培养基，PBS 洗涤细胞，加入胰酶消化，镜下细胞收缩变圆，完全培养基终止消化，收集细胞离心重悬分瓶扩增；该细胞增殖速度快，需及时传代，避免细胞老化。

1.实验全程需在生物安全柜中操作，避免空气中的微生物污染培养体系。

2.培养器皿需用0.1%明胶溶液包被30分钟以上，去除未结合明胶后使用。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.实验选用C57BL/6或BALB/c小鼠，需注意小鼠品系差异对实验结果的影响。 细胞长至80-90%融合时进行传代，用0.25%胰蛋白酶消化后按1:3比例扩培。