小鼠直肠平滑肌细胞

小鼠直肠平滑肌细胞

基于酶消化-差速贴壁联合策略从C57BL/6小鼠直肠平滑肌细胞组织获取平滑肌细胞，经 0.1% 胶原酶 IV 消化 2h 后通过 30% 胎牛血清梯度贴壁纯化，接种于纤连蛋白包被培养皿中，使用 DMEM 高糖培养基（含 15% FBS、10 ng/mL EGF 及 50 μg/mL 抗坏血酸）培养；通过免疫荧光双标检测 α-SMA/SM-MHC 共表达，RT-qPCR 分析平滑肌分化标志基因转录水平，并观察细胞在收缩刺激下的形态变化。

产品名称：小鼠直肠平滑肌细胞

英文名称： Mouse Rectal Smooth Muscle Cells

组织来源： 直肠组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠直肠平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠直肠平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠直肠平滑肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠直肠平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

复苏前准备：提前开启 37℃水浴锅，完全培养基置于 37℃水浴复温，离心管、培养瓶、移液枪头等耗材紫外灭菌 30min，超净台内部擦拭消毒，核对细胞冻存管标签信息，确认细胞批次、细胞类型无错误，同时检查培养基有无浑浊、沉淀变质情况。

细胞快速复苏融化：取出液氮储存的小鼠直肠平滑肌细胞冻存管，迅速放入 37℃水浴，轻柔晃动冻存管，1‑2min 内完成冻存液融化，管内仅剩微小冰晶即可，避免长时间水浴造成细胞热损伤，冻存管外壁使用 75% 酒精充分擦拭消毒后移入超净工作台。

冻存液稀释离心去除 DMSO：将冻存管内细胞悬液缓慢滴加至装有预温完全培养基的 15mL 离心管中，轻柔吹打混匀，800‑1000r/min 离心 5min，离心结束后小心弃去上层含 DMSO 的上清液，注意不要触碰底部细胞沉淀，防止细胞丢失。

细胞重悬接种培养：向离心管内加入适量专用完全培养基，使用移液枪轻柔缓慢吹打细胞沉淀，制成均匀单细胞悬液，镜下观察细胞分散状态，按照推荐细胞密度接种至 T25 细胞培养瓶，轻轻十字摇晃培养瓶，使细胞均匀平铺于瓶底，避免细胞局部堆积成团。

细胞培养箱孵育：将培养瓶平稳放置于 37℃、5% CO₂饱和湿度细胞培养箱内进行孵育，静置培养，前 24h 尽量避免挪动培养瓶，减少细胞悬浮脱落，给与细胞充足贴壁时间。

换液观察细胞状态：复苏 24h 后取出培养瓶，显微镜观察细胞贴壁率、形态，去除旧培养基，加入新鲜预热完全培养基，去除未贴壁死亡细胞；后续每 2‑3 天更换一次培养基，持续观察平滑肌梭形典型形态，监控细胞有无污染、老化。

传代 / 收获判定处理：当细胞汇合度达到 70%‑80% 时开展传代操作，弃培养基，PBS 清洗细胞，加入胰酶消化，镜下观察细胞皱缩变圆，立刻加入完全培养基终止消化，收集细胞悬液离心，重悬后分瓶扩增或者用于后续实验，严禁细胞过度汇合导致细胞表型发生改变。

1.取材时需迅速分离目标血管组织，用含肝素的PBS冲洗管腔去除残留血液，整个过程控制在15分钟以内。

2.培养器皿需用0.2%明胶预包被30分钟，PBS洗涤后加入内皮细胞专用培养基方可接种。

3.培养过程中需注意CO2浓度维持在5%正负0.5%，pH值保持在7.2-7.4范围内。

4.培养基中需添加EGM-2内皮细胞生长添加剂套装，包含VEGF、FGF-b、EGF和hydrocortisone等关键生长因子。

5.换液前预先检查培养基pH和颜色，若培养基过早变黄提示需缩短换液间隔至24小时。