小鼠支气管成纤维细胞

小鼠支气管成纤维细胞

采用组织块贴壁法从C57BL/6小鼠的支气管成纤维细胞来源组织中分离成纤维细胞，经 0.25% 胰蛋白酶消化传代后，接种于未包被培养皿中，使用 DMEM 低糖培养基（含 10% FBS、100 U/mL 青霉素和 100 μg/mL 链霉素）培养；通过免疫荧光染色检测成纤维细胞标志物 CD90（Thy-1）、CD44、vimentin 及 FSP-1 表达，结合细胞形态学观察（梭形、长突起 morphology）和碱性磷酸酶（ALP）活性检测确认细胞身份。

产品名称：小鼠支气管成纤维细胞

英文名称： Mouse Bronchial Fibroblasts

组织来源： 支气管组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠支气管成纤维细胞采用胶原酶-胰酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠支气管成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠支气管成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠支气管成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

小鼠麻醉处死，75% 乙醇消毒颈部及胸腔，无菌解剖暴露气管与支气管，完整分离支气管组织，预冷 PBS 冲洗，去除血液、周围结缔组织、淋巴结。

剥离支气管外侧结缔组织，去除支气管上皮层，收集支气管间质组织，剪碎至 1mm³ 组织碎块，加入 I 型胶原酶消化液 37℃消化 40‑50min。

完全培养基中和消化反应，反复轻柔吹打，100μm 细胞筛过滤除去未消化组织，收集细胞悬液。

细胞悬液 1000r/min 离心 5min，弃上清，PBS 重悬沉淀洗涤 2 次，清除消化酶、红细胞、组织碎片。

差速贴壁纯化，将细胞悬液接种于培养瓶短时孵育，支气管成纤维细胞快速贴壁，舍弃悬浮的支气管上皮杂细胞，提升细胞纯度。

成纤维细胞完全培养基重悬细胞沉淀，计数，调整接种密度接种，置于 37℃、5% CO₂培养箱静置培养。

24h 镜检贴壁状态，更换新鲜培养基去除死细胞；每 2‑3 天换液，观察长梭形细胞形态，汇合度 80% 进行传代，严防上皮细胞混杂增殖。

1.操作过程需保持低温环境，室温下长时间暴露会导致细胞活力显著下降。

2.培养器皿需提前用0.1mg/ml多聚赖氨酸包被过夜，未包被的培养板细胞贴壁效率极低。

3.实验用药处理建议设置溶剂对照组，DMSO终浓度不超过0.1%以避免溶剂毒性。

4.培养基中需加入1%胰岛素转铁蛋白硒(ITS)补充剂和10nM地塞米松。

5.细胞融合度达到70-80%时传代，胰酶消化时间控制在1-2分钟避免过度消化。