产品名称 | 小鼠真皮毛乳头细胞 | 组织来源 | 毛囊组织 |
英文名称 | Mouse Dermal Papilla Cells | 种属 | 昆明小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3404 |
方法简介 实验室分离的小鼠真皮毛乳头细胞采用胶原酶-中性蛋白酶混合消化法制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠真皮毛乳头细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）
培养基： 小鼠真皮毛乳头细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 梭形、多角形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠真皮毛乳头细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：C57BL/6小鼠，取健康组织块约0.5-1g
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12完全培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质
剪碎组织至1mm3大小，加入0.25%胰蛋白酶，37度消化30-40分钟
加入II型胶原酶继续消化30分钟，胎牛血清终止消化
经70um和40um滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
重悬细胞后接种于未包被培养皿中，37度培养24小时后换液去除悬浮细胞
原代培养要点
成纤维细胞贴壁能力强，接种后12-24小时大部分细胞贴壁，呈梭形或星形
使用DMEM/F12+10%FBS完全培养基，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，细胞融合达80-90%时可用0.25%胰蛋白酶消化传代
原代成纤维细胞增殖较快，通常7-14天可达融合状态
常见问题优化
成纤维细胞生长过快：适当降低FBS浓度至5-10%可减缓生长速度
细胞老化：控制传代次数在10代以内，早期代次实验结果更可靠
交叉污染：严格无菌操作，注意区分成纤维细胞与肌成纤维细胞表型
大鼠有凸素1(PROM1；CD133)elisa试剂盒 | BDCM白血病 |
大鼠白细胞介素18前体(Pro-IL-18)elisa试剂盒 | 小鼠子宫成纤维细胞 |
大鼠α1(Ⅰ)型前胶原(Pro-collagen I α1)elisa试剂盒 | 小鼠肾上腺皮质细胞 |
大鼠前脑源性神经营养因子(proBDNF)elisa试剂盒 | EL-4-B5（小鼠胸腺淋巴瘤细胞）(种属鉴定正确） |
大鼠补体因子D(CFD)elisa试剂盒 | 人皮肤鳞癌细胞HSC-5(STR鉴定正确) |
大鼠补体因子H相关蛋白2(CFHR2)elisa试剂盒 | 大鼠食管平滑肌细胞 |
猪肝细胞生长因子（HGF）elisa试剂盒 | 大鼠原代内皮祖细胞 |
PATU8988t（PATU8988）人胰腺癌细胞专用培养基 | MDM1基因过表达细胞株 |
TM3小鼠睾丸间质细胞专用培养基 | CPB1基因过表达细胞株 |
小鼠原代膀胱间质细胞专用培养基 | ZNF287基因过表达细胞株 |
Eca-109 细胞专用培养基 | PIBF1基因过表达细胞株 |
牛原代支气管上皮细胞专用培养基 | SETDB2基因过表达细胞株 |
小鼠真皮毛乳头细胞大鼠原代肌腱细胞专用培养基 | ADRA2A基因过表达细胞株 |
EOL-1细胞专用培养基 | BRINP1基因过表达细胞株 |
无菌处死小鼠，消毒背部皮肤，剪取背部含丰富毛囊的皮肤，预冷 PBS 清洗，去除皮下脂肪筋膜，DispaseⅡ4℃消化过夜分离真皮。
收集真皮层组织，置于无菌培养皿体视显微镜下操作，显微器械分离单个完整毛囊，小心剥离毛囊下端球状毛乳头结构，收集毛乳头组织小块。
将收集的毛乳头组织剪碎，加入 I‑IV 混合胶原酶消化液，37℃消化 30‑40min，轻柔吹打，至组织松散，加入完全培养基终止消化。
100μm 细胞筛过滤悬液，除去组织残渣，收集细胞悬液，1000r/min 离心 5min，弃上清，PBS 重悬沉淀洗涤 2 次去除酶残留。
可选用组织块贴壁法辅助培养，将毛乳头小组织块均匀摆放在培养瓶底，轻微倒扣孵育使组织贴牢，再补加毛乳头细胞专用培养基。
调整细胞浓度接种，放置 37℃、5% CO₂培养箱，静置培养，前 48h 尽量不要移动培养瓶，防止组织块漂浮脱落。
5‑7 天观察细胞从组织块向外爬出，半量换液；之后每 3 天换液一次，细胞汇合 75‑80% 进行传代，该细胞增殖能力有限，尽量使用低代次细胞做实验。
