产品名称 | 小鼠真皮成纤维细胞 | 组织来源 | 皮肤组织 |
英文名称 | Mouse Dermal Fibroblasts | 种属 | 昆明小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2981 |
方法简介 实验室分离的小鼠真皮成纤维细胞采用先中性蛋白酶消化、后胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠真皮成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 小鼠真皮成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠真皮成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：C57BL/6小鼠，取健康组织块约0.5-1g
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12完全培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质
剪碎组织至1mm3大小，加入0.25%胰蛋白酶，37度消化30-40分钟
加入II型胶原酶继续消化30分钟，胎牛血清终止消化
经70um和40um滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
重悬细胞后接种于未包被培养皿中，37度培养24小时后换液去除悬浮细胞
原代培养要点
成纤维细胞贴壁能力强，接种后12-24小时大部分细胞贴壁，呈梭形或星形
使用DMEM/F12+10%FBS完全培养基，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，细胞融合达80-90%时可用0.25%胰蛋白酶消化传代
原代成纤维细胞增殖较快，通常7-14天可达融合状态
常见问题优化
成纤维细胞生长过快：适当降低FBS浓度至5-10%可减缓生长速度
细胞老化：控制传代次数在10代以内，早期代次实验结果更可靠
交叉污染：严格无菌操作，注意区分成纤维细胞与肌成纤维细胞表型
大鼠神经生长因子前体(proNGF)elisa试剂盒 | ATN-1白血病 |
大鼠白介素1β前体(pro-IL1B)elisa试剂盒 | 小鼠睾丸间质细胞 |
大鼠孕酮(PROG)elisa试剂盒 | 小鼠颌下腺上皮细胞 |
大鼠前脑钠素(proBNP)elisa试剂盒 | HT22 (小鼠海马神经元细胞)(新引进，STR鉴定正确) |
大鼠补体因子Bb(CBb)elisa试剂盒 | 小鼠肺腺癌细胞LA795（种属鉴定） |
大鼠补体因子H(CFH)elisa试剂盒 | 猪肾小管上皮细胞 |
猪肝型脂肪酸结合蛋白（LFABP）elisa试剂盒 | 人原代卵巢囊肿细胞 |
PATU8988t（PATU8988）人胰腺癌细胞专用培养基 | FUT9基因过表达细胞株 |
TM3小鼠睾丸间质细胞专用培养基 | CYLC1基因过表达细胞株 |
兔原代脑膜细胞专用培养基 | DCDC2B基因过表达细胞株 |
EBC-1细胞专用培养基 | ANHX基因过表达细胞株 |
牛原代脂肪干细胞专用培养基 | DCDC2C基因过表达细胞株 |
小鼠真皮成纤维细胞大鼠原代肌腱干细胞专用培养基 | HCRTR1基因过表达细胞株 |
EMT6细胞专用培养基 | GUF1基因过表达细胞株 |
小鼠处死后全身 75% 乙醇消毒，剪下背部皮肤组织，放入预冷 PBS，仔细去除皮下脂肪、筋膜，将皮肤组织表皮面朝上，修剪去除多余附属组织。
将皮肤组织剪为细条，加入 DispaseⅡ 酶，4℃过夜消化，分离表皮与真皮层，收集真皮组织，剪碎至 1mm³ 左右组织碎块。
加入 I 型胶原酶消化液，37℃水浴振荡消化 40‑60min，期间间隔吹打，待组织充分松散后，加入完全培养基终止消化。
使用 100μm 无菌筛网过滤细胞混合液，滤除未消化组织，收集细胞悬液，1000r/min 离心 5min，弃上清，PBS 洗涤细胞沉淀 2 次。
重悬后进行差速贴壁处理，接种短暂孵育，让成纤维细胞优先贴壁，舍弃含有角质细胞的上层悬浮液体，实现杂细胞去除。
真皮成纤维细胞完全培养基重悬沉淀，计数，配置合适细胞浓度接种于培养瓶，置于 37℃、5% CO₂培养箱静置孵育。
培养 24h 更换培养基清除死细胞，每 48h 换液；镜下观察梭形放射状细胞形态，汇合度 80% 及时传代，避免细胞老化衰老。
