小鼠阴道壁成纤维细胞

小鼠阴道壁成纤维细胞

运用胶原酶 I 消化法从C57BL/6小鼠阴道壁成纤维细胞组织中提取间充质成分，经密度梯度离心去除血液细胞后，接种于胶原 IV 包被的培养表面，使用含 10% FBS 的 DMEM/F12 培养基培养；通过流式细胞术分析 CD90+、CD44+、CD105+ 阳性率及 CD34-、CD45- 阴性率，免疫荧光染色显示 vimentin 强阳性、角蛋白阴性，并经成纤维细胞集落形成实验验证增殖能力。

产品名称：小鼠阴道壁成纤维细胞

英文名称： Mouse Vaginal Wall Fibroblasts

组织来源： 阴道组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠阴道壁成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠阴道壁成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  大鼠阴道壁成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代左右；2代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠阴道壁成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

小鼠脱臼处死，75% 酒精消毒下腹部及会阴部皮肤，无菌操作剪下阴道壁组织，置于预冷 PBS 中，仔细剔除黏膜上皮、肌肉以及周边脂肪结缔组织。

将修剪干净的阴道壁组织转移培养皿，剪切成约 1mm³ 细小组织碎块，采用组织块贴壁法或者酶消化法，加入 I 型胶原酶消化液，37℃消化 40‑50min。

完全培养基终止酶消化，反复吹打组织碎块，100μm 细胞筛过滤，除去未消化完全的组织残渣，收集得到细胞悬液。

细胞悬液离心 1000r/min 离心 5min，弃上清，无菌 PBS 重悬沉淀洗涤 2 次，洗去消化酶、破碎细胞与红细胞杂质。

差速贴壁纯化：将细胞悬液加入培养瓶孵育，成纤维细胞快速贴壁，去除后期贴壁的上皮类杂细胞，进一步提升细胞纯度。

成纤维细胞完全培养基重悬细胞沉淀，细胞计数，调整细胞密度接种，放置 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置培养。

24h 镜下观察贴壁情况，更换新鲜培养基去除悬浮死细胞；每 2‑3 天更换一次培养基，细胞汇合至 80%‑85% 进行传代，观察长梭形典型成纤维细胞形态。

1.实验全程需在生物安全柜中操作，避免空气中的微生物污染培养体系。

2.培养器皿需用0.1%明胶溶液包被30分钟以上，去除未结合明胶后使用。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.培养基中需加入1%胰岛素转铁蛋白硒(ITS)补充剂和10nM地塞米松。

5.实验选用C57BL/6或BALB/c小鼠，需注意小鼠品系差异对实验结果的影响。 该细胞传代比例为1:2至1:3，每3-4天换液一次，避免过度融合影响细胞状态。