小鼠胰腺导管上皮细胞

小鼠胰腺导管上皮细胞

基于组织块贴壁法从C57BL/6小鼠的胰腺导管上皮细胞来源组织中获取初始细胞，经 0.25% 胰蛋白酶-EDTA 传代后，采用特异性上皮细胞培养体系（K-SFM 基础培养基 supplemented with bovine pituitary extract）维持培养；通过免疫荧光双标技术检测 E-cadherin/CK5 共表达，Western blot 分析上皮标志蛋白表达谱，并结合Transwell模型评估细胞极化和紧密连接蛋白（ZO-1、Claudin）的定位表达。

产品名称：小鼠胰腺导管上皮细胞

英文名称： Mouse Pancreatic Ductal Epithelial Cells

组织来源： 胰腺组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠胰腺导管上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合密度梯度离心法、差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠胰腺导管上皮细胞经Cytokeratin-19免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 小鼠胰腺导管上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠胰腺导管上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

无菌处死小鼠，乙醇消毒体表，开腹取出完整胰腺，预冷 PBS 反复冲洗胰腺组织，剔除附着脂肪、血管，尽量保留胰腺导管结构，转移至无菌培养皿。

无菌剪刀将胰腺剪为细小组织块，加入含 DNase I 的胶原酶 IV 消化液，37℃水浴消化 25‑30min，每隔 5min 轻柔颠倒混匀，直至组织松散，不出现大块硬结。

加入预热完全上皮培养基终止酶消化，移液管轻柔吹打组织，依次过 100μm、70μm 细胞筛，滤除大块胰腺腺泡组织，收集过滤后的细胞混合悬液。

悬液离心 1000r/min 5min，丢弃上清，PBS 重悬沉淀洗涤 2 次，去除消化酶、破碎细胞与红细胞，减少杂细胞干扰。

采用差速贴壁法初步去除成纤维细胞杂细胞，将细胞悬液置于培养瓶短暂孵育，成纤维细胞优先贴壁，收集未贴壁的导管上皮细胞悬液。

胰腺导管上皮专用完全培养基重悬细胞沉淀，计数并校准接种密度，接种于胶原包被的培养器皿，放入 37℃，5% CO₂培养箱静置孵育，减少挪动避免影响贴壁。

培养 24h 后镜检细胞贴壁情况，更换培养基清除悬浮死细胞；每 48h 换液，观察鹅卵石样上皮细胞形态，汇合度 70‑80% 进行传代，避免细胞过度增殖老化。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.培养板需预先用胶原I型(50ug/ml)包被过夜，以增强细胞贴壁能力。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.培养基中需加入1%胰岛素转铁蛋白硒(ITS)补充剂和10nM地塞米松。

5.建议传代比例为1:2，每2-3天更换新鲜培养基，维持细胞最佳生长状态。