产品名称 | 小鼠羊膜间质细胞 | 组织来源 | 胎盘组织 |
英文名称 | Mouse Amniotic Mesenchymal Stromal Cells | 种属 | 昆明小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3376 |
方法简介 实验室分离的小鼠羊膜间质细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠羊膜间质细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 小鼠羊膜间质细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3代左右
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠羊膜间质细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：C57BL/6小鼠，取材需严格无菌操作
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、MSC专用培养基/干细胞专用培养基、FBS、beta-巯基乙醇、L-谷氨酰胺
分离纯化步骤
从实验动物目标组织(骨髓/脂肪/脐带/牙髓等)中分离间充质成分
组织剪碎后经胶原酶消化(37度、2小时)，过滤获取单细胞悬液
采用密度梯度离心(Ficoll)纯化单个核细胞层
将细胞接种于培养皿中，间充质干细胞24-48小时贴壁，非贴壁细胞换液去除
贴壁细胞扩大培养至60-70%融合后，流式分选CD90+/CD105+/CD34-/CD45-细胞
原代培养要点
干细胞培养需使用专用培养基(含20%FBS的MSC培养基或DMEM/F12+20%FBS)
接种密度建议5x10^3-1x10^4 cells/cm2，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，间充质干细胞呈梭形贴壁生长，融合达80%时传代
干细胞具有三系分化潜能，可在诱导培养基中向成骨/成脂/成软骨方向分化
常见问题优化
干细胞增殖缓慢：添加FGF-2(10ng/mL)和EGF(10ng/mL)可促进增殖
干细胞分化潜能下降：控制传代次数在3-5代以内，避免过度扩增
细胞纯度不高：采用流式分选CD90+/CD105+双阳性标记可提高纯度
大鼠P选择素(P-Selectin)elisa试剂盒 | SW620+luc人结直肠腺癌细胞+luc |
大鼠鞘脂激活蛋白原(PSAP)elisa试剂盒 | 小鼠肝间质细胞 |
大鼠过氧化物还原酶6(Prx6)elisa试剂盒 | 小鼠肾动脉平滑肌细胞 |
大鼠同源盒基因转录因子1(PROX-1)elisa试剂盒 | OKT 11 (小鼠杂交瘤细胞(抗CD2)) |
大鼠补体成分4d(C4d)elisa试剂盒 | 小鼠乳腺上皮细胞HC11（种属鉴定） |
大鼠补体成分5a受体1(C5aR1)elisa试剂盒 | 小鼠脑微血管周细胞 |
猪弓形体抗体（Tox Ab）elisa试剂盒 | 大鼠原代卵巢表面上皮细胞 |
Panc 03.27人胰腺癌细胞专用培养基 | ZNF618基因过表达细胞株 |
SV40-MES-13小鼠肾小球系膜细胞专用培养基 | DRD4基因过表达细胞株 |
人原代肾成纤维细胞专用培养基 | FPGT基因过表达细胞株 |
DT40细胞专用培养基 | AGGF1基因过表达细胞株 |
人风湿性关节滑膜成纤维细胞永生化细胞专用培养基 | PPARGC1A基因过表达细胞株 |
小鼠羊膜间质细胞大鼠原代海绵体内皮细胞专用培养基 | BRINP1基因过表达细胞株 |
EBC-1细胞专用培养基 | DHX33基因过表达细胞株 |
羊膜组织取材收集：取孕鼠，安乐死后无菌打开子宫，取出胚胎囊，小心分离完整羊膜囊组织，预冷无菌 PBS 浸泡，剔除绒毛膜、胚胎等其他附属组织。
羊膜漂洗清理杂质：PBS 反复冲洗羊膜组织，冲净胎血、胚胎碎屑，显微镜下剔除羊膜表面残留绒毛与血块，分清羊膜上皮面与间质面。
组织剪碎酶解处理：将羊膜组织剪碎至 1‑2 mm 碎块，转移离心管，加入 Ⅰ 型胶原酶 + 透明质酸酶混合消化液，37℃水浴消化 40‑50 min，间歇颠倒离心管，解离羊膜间质细胞。
终止消化过滤悬液：羊膜间质细胞完全培养基终止酶消化，充分吹打悬液，70 μm 细胞筛过滤除去羊膜组织残渣，收集单细胞悬液。
离心洗涤富集沉淀：1000 r/min 离心 7‑8 min，弃上清废液，羊膜间质完全培养基重悬细胞沉淀，再次离心洗涤去除消化酶残留。
细胞接种铺瓶孵育：调整细胞悬液密度接种普通细胞培养瓶，置于 37℃、5% CO₂培养箱静置，接种 48h 内不移动培养器皿，利于间质细胞贴壁。
换液传代维持干细胞特性：24h 首次换液，去除悬浮死细胞碎片；每 2‑3 天更换新鲜完全培养基；细胞汇合 80% 即可传代，严控传代代数，维持羊膜间质细胞干性。
