小鼠牙周膜成纤维细胞

小鼠牙周膜成纤维细胞

运用胶原酶 I 消化法从C57BL/6小鼠牙周膜成纤维细胞组织中提取间充质成分，经密度梯度离心去除血液细胞后，接种于胶原 IV 包被的培养表面，使用含 10% FBS 的 DMEM/F12 培养基培养；通过流式细胞术分析 CD90+、CD44+、CD105+ 阳性率及 CD34-、CD45- 阴性率，免疫荧光染色显示 vimentin 强阳性、角蛋白阴性，并经成纤维细胞集落形成实验验证增殖能力。

产品名称：小鼠牙周膜成纤维细胞

英文名称： Mouse Periodontal Ligament Fibroblasts

组织来源： 牙周膜组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠牙周膜成纤维细胞采用胶原酶-胰蛋白酶联合消化法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠牙周膜成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠牙周膜成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠牙周膜成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

牙周膜组织取材分离：小鼠安乐死后消毒颌部，无菌剥离小鼠颌骨，拔除牙齿，显微镜下精细刮取牙根表面薄层牙周膜软组织，预冷 PBS 收集组织，剔除牙骨质、牙槽骨碎片。

组织漂洗充分剪碎：PBS 多次漂洗牙周膜组织，去除血液、骨屑，显微剪刀剪碎牙周膜组织至 1 mm³ 细小组织块。

Ⅰ 型胶原酶消化解离：组织碎块移入 Ⅰ 型胶原酶消化液，37℃水浴消化 40‑50 min，间隔 5min 颠倒混匀，待组织松散絮化，终止消化。

终止消化过滤悬液：牙周膜成纤维完全培养基终止酶反应，充分吹打组织，70 μm 细胞筛过滤除去骨与组织残渣，收集单细胞悬液。

离心洗涤细胞沉淀：1100 r/min 离心 7‑8 min，弃上清废液，牙周膜成纤维完全培养基重悬沉淀，二次离心洗涤去除消化酶杂质。

接种培养瓶静置贴壁：调节细胞密度接种普通培养瓶，置于 37℃、5% CO₂培养箱，接种后 24h 不要晃动培养瓶，方便牙周膜成纤维细胞贴壁伸展。

换液传代维持细胞表型：24‑36h 首次换液，去除悬浮死细胞碎片；每 2‑3 天更换培养基；细胞汇合 80% 进行传代，严格控制传代次数，防止细胞表型发生改变。

1.所有试剂需提前预热至37度，冷试剂直接加入会显著降低细胞存活率。

2.使用Matrigel基质胶稀释后包被培养器皿，4度过夜后37度预热使用。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.培养基中需加入1%胰岛素转铁蛋白硒(ITS)补充剂和10nM地塞米松。

5.建议传代比例为1:2，每2-3天更换新鲜培养基，维持细胞最佳生长状态。