产品名称 | 小鼠牙龈上皮细胞 | 组织来源 | 牙龈组织 |
英文名称 | Mouse Gingival Epithelial Cells | 种属 | 昆明小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3271 |
方法简介 实验室分离的小鼠牙龈上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠牙龈上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 小鼠牙龈上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠牙龈上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：C57BL/6小鼠，组织取材量充足，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质，剪碎至1mm3大小
加入0.25%胰蛋白酶和II型胶原酶混合消化液，37度消化30-40分钟，期间振荡2-3次
消化完成后加入含20%胎牛血清的完全培养基终止消化，用移液器反复吹打分散
依次过70um、40um细胞滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
用完全培养基重悬细胞，计数并检测活力，调整细胞密度后进行接种
原代培养要点
调整细胞密度至5x10^4-1x10^5 cells/cm2接种于胶原包被培养皿，37度、5% CO2培养
上皮细胞贴壁较慢，通常需24-48小时方可观察到贴壁细胞，建议48小时首次换液
培养基每2-3天更换一次，使用含10% FBS的DMEM/F12完全培养基
细胞融合达80-90%时可进行传代，建议采用温和的胰蛋白酶-EDTA(0.05%)消化传代
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用多聚赖氨酸或胶原预包被培养皿表面，可显著提高贴壁效率
上皮细胞生长缓慢：培养基中添加0.1mM IBMX和5ug/mL胰岛素，可促进上皮细胞增殖
交叉污染：严格无菌操作，培养基中添加双抗(100U/mL青霉素+100ug/mL链霉素)
大鼠磷酸化细胞信号转导分子SMAD-3(P-SMAD3)elisa试剂盒 | ATRFLOX结肠癌 |
大鼠P选择素(P-Selectin)elisa试剂盒 | 猪膀胱上皮细胞 |
大鼠突触后致密物95(PSD-95)elisa试剂盒 | 兔舌表皮细胞 |
大鼠过氧化物还原酶6(Prx6)elisa试剂盒 | 人肾小球系膜细胞 |
大鼠补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白3(C1QTNF3)elisa试剂盒 | 小鼠宫颈癌细胞带荧光素酶U14+LUC（种属鉴定） |
大鼠补体成分4b(C4b)elisa试剂盒 | 人主动脉内皮细胞 |
猪谷氨酸脱氢酶（GDH）elisa试剂盒 | 人原代口腔成纤维细胞 |
P53R [JHU-56]人结直肠癌细胞专用培养基 | CALR3基因过表达细胞株 |
STC-1小鼠小肠内分泌细胞专用培养基 | ZNF287基因过表达细胞株 |
大鼠原代下颌骨细胞专用培养基 | CRTAC1基因过表达细胞株 |
DoHH2细胞专用培养基 | DCDC2C基因过表达细胞株 |
人肝窦内皮细胞永生化细胞专用培养基 | ADRA2A基因过表达细胞株 |
小鼠牙龈上皮细胞大鼠原代海马神经干细胞专用培养基 | CALCR基因过表达细胞株 |
E14细胞专用培养基 | H6PD基因过表达细胞株 |
牙龈上皮组织取材：小鼠安乐死后消毒颌面部，无菌分离牙龈组织，预冷 PBS 清洗，显微镜下分离牙龈表层上皮组织，剔除下方结缔成纤维组织。
EDTA‑胰酶组织解离：将牙龈组织放入含 EDTA 的解离缓冲液，4℃孵育 25‑30 min，松动上皮层与固有层连接；再加入低浓度胰酶 37℃短时间消化，解离上皮细胞。
机械震荡洗脱上皮细胞：取出组织，加入牙龈上皮完全培养基，反复吹打震荡，洗脱牙龈上皮细胞，弃去残余结缔组织块。
筛网过滤收集悬液：70 μm 无菌细胞筛过滤细胞悬液，除去组织残渣，获取牙龈上皮细胞悬液。
离心洗涤去除酶残留：1000 r/min 离心 7 min，弃上清废液，牙龈上皮专用完全培养基轻柔重悬沉淀，再次离心洗涤清除消化酶、红细胞碎片。
基质胶包被板接种：调整细胞密度，接种基质胶包被的培养板，放置 37℃5% CO₂培养箱静置孵育，上皮细胞需要基质支撑提升贴壁存活率。
换液纯化抑制杂细胞：24h 半量换液，去除悬浮死细胞；每 2‑3 天更换上皮完全培养基；尽量抑制成纤维杂细胞生长，原代牙龈上皮传代能力有限，尽早开展实验。
