小鼠雪旺氏细胞

小鼠雪旺氏细胞

采用差速贴壁法从C57BL/6小鼠的雪旺氏细胞来源脑组织分离胶质细胞，经胶原酶 IV 消化和 Percoll 梯度离心后，接种于多聚赖氨酸包被的培养皿中，使用 DMEM/F12 培养基（含 10% FBS、20 ng/mL FGF-2 及 10 ng/mL PDGF-AA）培养；通过免疫荧光染色检测胶质细胞特异性标志物 GFAP（星形胶质细胞）、O4/O4a（少突胶质细胞）、Iba1（小胶质细胞）或 S100β 表达，结合细胞形态学观察（星形突起、多突起 morphology）确认胶质细胞亚型身份。

产品名称：小鼠雪旺氏细胞

英文名称： Mouse Schwann Cells

组织来源： 神经组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠雪旺氏细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠雪旺氏细胞经S-100免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠雪旺氏细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 梭形、多角形

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠雪旺氏细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

周围神经组织取材：小鼠安乐死后 75% 酒精消毒，无菌解剖取出坐骨神经等外周神经组织，放入预冷 HBSS 缓冲液，仔细剔除神经外附着肌肉、脂肪结缔组织。

神经组织漂洗精细修剪：HBSS 多次漂洗神经组织去除血液，显微镜下剥离神经外膜，将神经剪成 1‑2 mm 短神经片段。

胶原酶‑胰酶分步消化：神经片段加入 Ⅰ 型胶原酶 37℃预消化 20 min，再补加胰蛋白酶继续消化 15‑20 min，间歇颠倒离心管，让雪旺氏细胞从神经束解离。

终止消化制备单细胞悬液：雪旺氏细胞完全培养基终止酶反应，反复轻柔吹打神经组织，70 μm 筛网过滤除去神经束残渣，收集单细胞悬液。

离心洗涤细胞沉淀：1000 r/min 离心 7 min，弃上清废液，雪旺氏完全培养基重悬沉淀，再次离心洗涤去除消化酶与碎片。

多聚赖氨酸包被瓶接种：调节细胞密度，接种多聚‑L‑赖氨酸包被的培养瓶，37℃5% CO₂培养箱静置，接种 48h 内不晃动培养器皿，方便细胞贴壁伸展。

药物纯化与传代培养：24h 换液，加入阿糖胞苷抑制成纤维杂细胞增殖；每 2‑3 天更换添加生长因子的雪旺氏完全培养基；细胞汇合 75‑80% 进行传代，维持雪旺氏细胞梭形形态。

1.操作过程中需严格无菌操作，任何微生物污染都会导致细胞死亡或实验结果偏差。

2.使用Matrigel基质胶稀释后包被培养器皿，4度过夜后37度预热使用。

3.部分细胞类型需要特定的细胞外基质包被才能正常贴壁和发挥功能，需提前优化条件。

4.补充10ug/ml胰岛素、5ug/ml转铁蛋白和2nM三碘甲腺原氨酸(T3)。

5.细胞融合度达到70-80%时传代，胰酶消化时间控制在1-2分钟避免过度消化。