产品名称 | 小鼠嗅球神经元细胞 | 组织来源 | 嗅球组织 |
英文名称 | Mouse Olfactory Bulb Neurons | 种属 | 昆明小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3133 |
方法简介 实验室分离的小鼠嗅球神经元细胞采用胰蛋白酶消化法、神经元专用培养基培养筛选结合化学试剂抑制法制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠嗅球神经元细胞经β-Tubulin-Ⅲ免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）
培养基： 小鼠嗅球神经元细胞完全培养基(含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 神经元细胞样
传代比例： 不传代
传代特性： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群
消化液： 0.125%胰蛋白酶
小鼠嗅球神经元细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：C57BL/6小鼠，需快速取材以保证神经元活力
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、Neurobasal培养基、B27添加剂、NGF、BDNF、NT-3、聚赖氨酸、脑基质胶
分离纯化步骤
取实验动物目标脑区/脊髓/神经组织，用预冷无钙镁PBS仔细冲洗
在显微镜下仔细分离目标区域，去除血管和膜组织，剪碎至1mm3
用0.25%胰蛋白酶在37度消化15-20分钟，加入DNase I辅助消化
用含FBS的DMEM终止消化，移液器轻柔吹打制成单细胞悬液
经40um滤网过滤后，300g离心5分钟收集神经元细胞
原代培养要点
将神经元细胞接种于聚赖氨酸包被的盖玻片或培养皿中，使用Neurobasal+B27培养基
接种密度建议1-2x10^5 cells/cm2，37度、5% CO2、95%湿度培养
神经元培养需添加NGF(10ng/mL)、BDNF(10ng/mL)等神经营养因子
7-14天后可观察到明显的神经元突起生长，21天后形成神经网络
常见问题优化
神经元存活率低：培养基中添加GlutaMAX和丙酮酸钠可提高神经元存活率
胶质细胞过度生长：使用Ara-C(10uM)处理可抑制胶质细胞增殖
神经元突起生长不良：添加NGF、BDNF等神经营养因子，使用脑基质胶包被基底
大鼠凝血酶原(PT)elisa试剂盒 | FTC-133甲状腺癌 |
大鼠磷酸化信号传导子及转录激活子2(p-STAT2)elisa试剂盒 | 兔羊膜间充质干细胞 |
大鼠磷酸化细胞信号转导分子SMAD-7(P-SMAD7)elisa试剂盒 | 兔角膜基质细胞 |
大鼠磷酸化细胞信号转导分子SMAD-2(P-SMAD2)elisa试剂盒 | 大鼠肾小管上皮细胞 |
大鼠丙酮酸脱氢酶磷酸酶(PDP)elisa试剂盒 | 人心脏微血管内皮细胞-永生化HCMEC |
大鼠丙酰辅酶A羧化酶β多肽(PCCB)elisa试剂盒 | 兔胰腺腺泡细胞 |
猪谷氨酰胺磷酸核糖焦磷酸转酰胺酶（GPPRPT）elisa试剂盒 | 兔原代支气管平滑肌细胞 |
OS-RC-2人肾癌细胞专用培养基 | AVIL基因过表达细胞株 |
SDOW-17小鼠杂交瘤细胞专用培养基 | MASP1基因过表达细胞株 |
大鼠原代颈动脉平滑肌细胞专用培养基 | ZNF341基因过表达细胞株 |
DMEM/F12无酚红培养基 | CCNI2基因过表达细胞株 |
人脐静脉内皮原代细胞+GFP细胞专用培养基 | ALKBH1基因过表达细胞株 |
小鼠嗅球神经元细胞大鼠原代骨髓巨噬细胞专用培养基 | FUT9基因过表达细胞株 |
DT40细胞专用培养基 | ADRA1B基因过表达细胞株 |
嗅球脑组织取材分离：小鼠安乐死后头部消毒，无菌解剖打开颅骨，完整剥离双侧嗅球组织，置于预冷 HBSS 缓冲液，显微镜下剔除脑膜、血管以及周围大脑组织，只保留嗅球。
组织漂洗剪碎糜化：HBSS 漂洗嗅球组织除去血液，显微剪刀将嗅球剪碎成 0.5‑1 mm 细小组织糜，操作轻柔，降低神经元机械损伤。
温和酶解脑组织：组织糜加入胰蛋白酶‑DNaseⅠ 消化液，37℃水浴消化 15‑20 min，间歇摇晃，组织微微浑浊立刻终止消化，防止神经元坏死。
终止消化过滤悬液：加入含血清神经元完全培养基终止消化，轻柔吹打离散细胞团，40 μm 细胞筛过滤，去除组织团块，收集单细胞悬液。
低速离心富集细胞：800 r/min 离心 6 min，弃上清，添加 B27 的神经元培养基轻柔重悬沉淀，再次离心洗涤清除消化酶、红细胞碎片。
包被培养板接种：调整细胞密度，接种多聚‑L‑赖氨酸包被培养板，放置 37℃5% CO₂培养箱，接种 48h 不要移动板子，保障神经元贴壁。
半量换液维持培养：24h 后做半量换液，去除漂浮死细胞，之后每 3 天半量更换神经元维持培养基；嗅球神经元为终末分化细胞，不可传代，观察神经元突触网络生长。
