小鼠嗅鞘细胞

小鼠嗅鞘细胞

从C57BL/6小鼠嗅鞘细胞脑组织标本经机械分离与胶原酶/DNAse 联合消化获取单细胞悬液，通过 37°C 预贴壁去除贴壁细胞（星形胶质细胞/成纤维细胞）后，将悬浮细胞转种于 PLL 包被培养皿中，使用含 B27、NGF 及 CNTF 的 Neurobasal 培养基培养小胶质细胞/神经胶质细胞；通过流式细胞术检测 CD11b/c、CR3（Mac-1）、MHC-II 表达，免疫荧光显示 Iba1/GFAP 阳性，并结合 LPS 刺激后细胞因子释放实验验证免疫应答功能。

产品名称：小鼠嗅鞘细胞

英文名称： Mouse Olfactory Ensheathing Cells

组织来源： 嗅球组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠嗅鞘细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法、结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠嗅鞘细胞经GFAP免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）

培养基： 小鼠嗅鞘细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 神经元、上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1代，不建议传代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠嗅鞘细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

嗅球嗅神经组织取材：小鼠安乐死后消毒头部，无菌剪开颅骨，取出脑部，体视显微镜下剥离嗅球以及嗅神经根部组织，剔除大脑皮层、脑膜血管等多余组织，浸泡预冷 HBSS 缓冲液。

组织漂洗剪碎处理：HBSS 缓冲液多次漂洗组织去除血液，显微剪刀将嗅球神经组织剪碎至 0.5‑1 mm 组织糜，尽量减少机械剪切对神经胶质细胞损伤。

胰酶‑胶原酶消化解离：组织糜移入胰蛋白酶 +Ⅰ 型胶原酶混合消化液，37℃水浴消化 20‑25 min，每 5min 颠倒混匀，组织松散即停止消化。

终止消化吹打过滤：加入含血清嗅鞘细胞完全培养基终止消化，轻柔吹打悬液离散细胞团，40 μm 细胞筛过滤，滤除组织残渣，收集单细胞滤液。

离心洗涤细胞沉淀：900 r/min 离心 6‑7 min，弃上清废液，嗅鞘细胞完全培养基重悬沉淀，再次离心洗涤一遍，去除消化酶、细胞碎片。

多聚赖氨酸包被板接种：调节细胞悬液浓度，接种多聚‑L‑赖氨酸包被的培养瓶，37℃5% CO₂培养箱静置孵育，48 小时内尽量不挪动培养器皿。

药物纯化与换液传代：接种 24h 后换液，加入阿糖胞苷抑制成纤维杂细胞增殖；每 2‑3 天更换新鲜培养基；细胞汇合 75‑80% 进行传代，维持嗅鞘细胞胶质形态。

1.所有试剂需提前预热至37度，冷试剂直接加入会显著降低细胞存活率。

2.培养器皿需提前用0.1mg/ml多聚赖氨酸包被过夜，未包被的培养板细胞贴壁效率极低。

3.细胞冻存后复苏需快速 thawing，37度水浴快速解冻后迅速加入预温培养基稀释DMSO。

4.培养基中需加入1%胰岛素转铁蛋白硒(ITS)补充剂和10nM地塞米松。

5.细胞长至80-90%融合时进行传代，用0.25%胰蛋白酶消化后按1:3比例扩培。