小鼠心脏纤维原细胞

小鼠心脏纤维原细胞

从C57BL/6小鼠心脏纤维原细胞组织标本经机械分离与胶原酶 II 联合消化获取成纤维细胞，经差速贴壁法纯化后接种于纤维连接蛋白包被培养皿中，采用 DMEM/F12 完全培养基（含 10% FBS、2 mM L-谷氨酰胺及 1% 非必需氨基酸）维持培养；通过免疫荧光检测 FSP-1/S100A4、α-SMA（活化型）及 PDGFR-β 表达，Western blot 分析细胞外基质蛋白（胶原 I、纤连蛋白）分泌水平，确认成纤维细胞功能表型。

产品名称：小鼠心脏纤维原细胞

英文名称： Mouse Cardiac Fibroblast Cells

组织来源： 心脏组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠心脏纤维原细胞采用胶原酶消化法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠心脏纤维原细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠心脏纤维原细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠心脏纤维原细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

心脏组织无菌取材：小鼠安乐死后消毒胸腔，开胸摘取完整心脏，预冷无菌 PBS 冲洗，挤净心腔内部血液，剪除心房、大血管，保留心室心肌组织。

漂洗剪碎心肌组织：PBS 反复冲洗心室组织除去残血，无菌剪刀将组织充分剪碎至 1 mm³ 组织糜，碎化充分有利于成纤维细胞释放。

胶原酶分次消化处理：组织碎块加入 Ⅰ 型胶原酶消化液，37℃水浴分次消化，每次 10‑15 min，分次收集消化上清，剩余组织继续消化。

差速贴壁纯化目标细胞：收集全部消化上清，加入完全培养基终止消化，70 μm 筛网过滤；悬液接种培养瓶孵育 90‑120 min，心脏成纤维细胞优先贴壁，舍弃悬浮心肌细胞悬液。

冲洗去除悬浮杂质：无菌 PBS 轻柔冲洗培养瓶，彻底洗去未贴壁心肌细胞、血细胞与组织碎片，保留贴壁的心脏纤维原细胞。

添加完全培养基培养：向培养瓶加入心脏成纤维细胞完全培养基，放置 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱孵育，观察细胞铺展形态。

换液传代扩增培养：24h 后更换新鲜培养基，后续 2‑3 天换液一次；细胞汇合 80% 时胰酶消化传代，避免细胞过度长满造成细胞衰老表型改变。

1.操作过程需保持低温环境，室温下长时间暴露会导致细胞活力显著下降。

2.使用Matrigel基质胶稀释后包被培养器皿，4度过夜后37度预热使用。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.补充10ug/ml胰岛素、5ug/ml转铁蛋白和2nM三碘甲腺原氨酸(T3)。

5.传代时用PBS轻柔洗涤2次后加入0.25%胰蛋白酶，室温作用2-3分钟收集细胞。