小鼠心脏干细胞

小鼠心脏干细胞

运用密度梯度离心法从C57BL/6小鼠心脏干细胞组织中分离间充质干细胞，经预培养去除非贴壁细胞后，选用含 10% FBS 和 2 mM L-谷氨酰胺的 DMEM/F12 培养基进行扩增；通过免疫荧光染色检测 Nanog、Oct4、Sox2 等多能性标志物表达，流式细胞术分析 CD34-、CD45-、HLA-DR- 表型，并经体外诱导分化实验（成骨/成脂/成软骨）验证多向分化潜能。

产品名称：小鼠心脏干细胞

英文名称： Mouse Cardiac Stem cells

组织来源： 心脏组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠心脏干细胞采用机械剪碎组织、胶原酶分次消化法结合差速贴壁、心脏干细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠心脏干细胞经c-kit免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）

培养基： 小鼠心脏干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 长梭形

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠心脏干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

心脏组织取材处理：取适龄小鼠，安乐死后消毒胸腔，无菌摘取心脏，预冷 PBS 充分冲洗，去除心腔内血液，剔除大血管、心房组织，收集心室心肌组织。

组织剪碎预处理：PBS 漂洗心室组织，剪刀充分剪碎至 1 mm³ 组织块，转移离心管，PBS 再次洗涤 2 次，去除血细胞杂质。

复合酶消化解离组织：加入 Ⅰ 型胶原酶 + 透明质酸酶混合消化液，37℃水浴消化 40‑50 min，每 5min 颠倒混匀，组织松散絮化即停止消化。

终止消化过滤收集悬液：干细胞完全培养基终止酶反应，充分吹打，70 μm、40 μm 细胞筛依次过滤，去除大块组织残渣，收集单细胞悬液。

离心洗涤富集细胞：1000 r/min 离心 7 min，弃上清，心脏干细胞专用无血清培养基重悬沉淀，二次离心洗涤去除消化酶残留。

低粘附培养板接种：调整细胞浓度，接种超低粘附细胞培养板，置于 37℃、5% CO₂培养箱悬浮培养，诱导心脏干细胞形成球样克隆。

换液扩增干细胞球：48h 后半量更换无血清干细胞培养基，去除死细胞碎片；每 2‑3 天换液，观察干细胞球生长，根据球体大小进行传代分球，维持干细胞干性。

1.操作过程需保持低温环境，室温下长时间暴露会导致细胞活力显著下降。

2.使用Matrigel基质胶稀释后包被培养器皿，4度过夜后37度预热使用。

3.细胞生长速率受血清批次影响较大，建议实验前对不同批次血清进行预实验筛选。

4.补充10ug/ml胰岛素、5ug/ml转铁蛋白和2nM三碘甲腺原氨酸(T3)。

5.建议传代比例为1:2，每2-3天更换新鲜培养基，维持细胞最佳生长状态。