小鼠小气道平滑肌细胞

小鼠小气道平滑肌细胞

采用组织块贴壁法从C57BL/6小鼠的小气道平滑肌细胞来源组织中分离原代细胞，经胰蛋白酶消化传代后，接种于明胶包被的培养皿中，使用 DMEM/F12 培养基（含 10% FBS、1% 双抗及 10 ng/mL PDGF-BB）培养；通过免疫荧光染色检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、平滑肌肌球蛋白重链（SM-MHC）及 h-caldesmon 等平滑肌特异性标志物，结合细胞形态学观察（梭形、蜂房样排列）确认平滑肌细胞身份。

产品名称：小鼠小气道平滑肌细胞

英文名称： Mouse Small Airway Smooth Muscle Cells

组织来源： 小气道组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠小气道平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠小气道平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠小气道平滑肌细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、EGF、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠小气道平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

肺组织取材分离小气道：小鼠安乐死后消毒胸腔，无菌开胸完整摘取小鼠肺组织，浸泡预冷 PBS，仔细分离肺内细小支气管（小气道），剔除大气管、肺实质肺泡组织以及周围结缔脂肪组织。

小气道组织清洗修剪：收集分离出的细小支气管，PBS 反复冲洗管腔内部，冲净肺泡液与血液，显微镊子剥离气道上皮层，保留气道外侧平滑肌组织，将平滑肌剪为 1 mm³ 组织碎块。

复合酶水浴消化解离：组织碎块转移至 Ⅱ 型胶原酶 + 弹性蛋白酶消化液，37℃水浴消化 40‑50 min，每 5min 颠倒混匀，待组织松散，及时停止消化，防止细胞过度损伤。

终止消化过滤悬液：加入含胎牛血清平滑肌完全培养基终止酶反应，充分吹打组织悬液，70 μm 细胞筛过滤，去除未消化的结缔组织残渣，收集单细胞悬液。

离心洗涤去除杂质碎片：1100 r/min 离心 7 min，弃上清废液，小气道平滑肌完全培养基重悬沉淀，再次离心洗涤，除去残留消化酶、细胞碎片。

细胞接种静置贴壁：调整细胞密度接种普通培养瓶，置于 37℃，5% CO₂细胞培养箱静置，接种最初 24h 禁止晃动，帮助平滑肌细胞贴壁伸展。

换液纯化以及传代：24h 首次换液，去除悬浮杂细胞，每 2‑3 天更换新鲜培养基；细胞汇合 80%‑85% 进行传代，控制胰酶消化时间，抑制成纤维细胞污染，维持平滑肌细胞表型。

1.实验全程需在生物安全柜中操作，避免空气中的微生物污染培养体系。

2.使用Matrigel基质胶稀释后包被培养器皿，4度过夜后37度预热使用。

3.该细胞对培养条件较为敏感，建议初次培养时设置多个平行实验以提高成功率。

4.培养基中需添加20ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)以维持细胞增殖活性。

5.实验选用C57BL/6或BALB/c小鼠，需注意小鼠品系差异对实验结果的影响。 细胞长至80-90%融合时进行传代，用0.25%胰蛋白酶消化后按1:3比例扩培。