产品名称 | 小鼠小脑颗粒细胞 | 组织来源 | 脑组织 |
英文名称 | Mouse Cerebellar Granule Cells | 种属 | 昆明小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3042 |
方法简介 实验室分离的小鼠小脑颗粒细胞采用胰蛋白酶消化法结合神经元专用培养基、化学试剂抑制法筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠小脑颗粒细胞经NSE免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）
培养基： 小鼠小脑颗粒细胞完全培养基(含B-27、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 神经元细胞样
传代比例： 不传代
传代特性： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠小脑颗粒细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：C57BL/6小鼠，需快速取材以保证神经元活力
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、Neurobasal培养基、B27添加剂、NGF、BDNF、NT-3、聚赖氨酸、脑基质胶
分离纯化步骤
取实验动物目标脑区/脊髓/神经组织，用预冷无钙镁PBS仔细冲洗
在显微镜下仔细分离目标区域，去除血管和膜组织，剪碎至1mm3
用0.25%胰蛋白酶在37度消化15-20分钟，加入DNase I辅助消化
用含FBS的DMEM终止消化，移液器轻柔吹打制成单细胞悬液
经40um滤网过滤后，300g离心5分钟收集神经元细胞
原代培养要点
将神经元细胞接种于聚赖氨酸包被的盖玻片或培养皿中，使用Neurobasal+B27培养基
接种密度建议1-2x10^5 cells/cm2，37度、5% CO2、95%湿度培养
神经元培养需添加NGF(10ng/mL)、BDNF(10ng/mL)等神经营养因子
7-14天后可观察到明显的神经元突起生长，21天后形成神经网络
常见问题优化
神经元存活率低：培养基中添加GlutaMAX和丙酮酸钠可提高神经元存活率
胶质细胞过度生长：使用Ara-C(10uM)处理可抑制胶质细胞增殖
神经元突起生长不良：添加NGF、BDNF等神经营养因子，使用脑基质胶包被基底
大鼠蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPs)elisa试剂盒 | Hs 852.T黑素瘤 |
大鼠非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶6(PTPN6)elisa试剂盒 | 兔角膜上皮细胞 |
大鼠多效生长因子(PTN)elisa试剂盒 | 兔骨髓肥大细胞 |
大鼠甲状旁腺激素1-34(PTH1-34)elisa试剂盒 | 兔肝内胆管上皮细胞 |
大鼠表面免疫原性蛋白(SIP)elisa试剂盒 | 人肝癌细胞Hep 3B2.1-7(STR鉴定正确) |
大鼠丙氨酸氨基转移酶(ALT)elisa试剂盒 | 小鼠子宫内膜基质细胞 |
猪骨成型蛋白7（BMP-7）elisa试剂盒 | 小鼠原代肾周细胞 |
Nthy-ori 3-1人甲状腺正常细胞专用培养基 | CRY1基因过表达细胞株 |
RAW 264.7小鼠单核巨噬白血病细胞专用培养基 | ZNF341基因过表达细胞株 |
小鼠原代海马神经干细胞专用培养基 | USP6NL基因过表达细胞株 |
D341Med细胞专用培养基 | DDX4基因过表达细胞株 |
人阴道成纤维细胞永生化细胞专用培养基 | FUT9基因过表达细胞株 |
小鼠小脑颗粒细胞大鼠原代股动脉内皮细胞专用培养基 | DENND1C基因过表达细胞株 |
DLD-1细胞专用培养基 | COL26A1基因过表达细胞株 |
小脑脑组织取材分离：选取新生小鼠，安乐死后头部酒精消毒，无菌解剖剪开颅骨，完整取出小脑，置于预冷 HBSS 缓冲液，显微镜下仔细剥离脑膜、血管，去除大脑、脑干多余组织，只保留小脑组织。
组织修剪漂洗碎化：HBSS 反复漂洗小脑组织，去除血液杂质，显微剪刀将小脑剪碎成 0.5‑1 mm 细小组织糜，操作轻柔，尽量减少神经细胞机械损伤。
胰酶体系温和消化：组织糜移入含胰蛋白酶‑DNaseⅠ 消化液，37℃水浴孵育 15‑20 min，间断摇晃离心管，组织微微浑浊立刻终止，严禁长时间消化造成神经元大量凋亡。
终止消化吹打过滤：加入含血清小脑颗粒细胞完全培养基终止消化，巴氏管轻柔吹打 10 次左右离散细胞团，40 μm 细胞筛过滤悬液，滤除组织团块，收集单细胞滤液。
低速离心收集细胞：800 r/min 离心 6 min，弃上清，神经元维持培养基轻柔重悬沉淀，再次离心洗涤一次，清除消化酶残留以及破碎红细胞。
多聚赖氨酸包被板接种：调节细胞悬液浓度，接种提前多聚‑L‑赖氨酸包被的培养板，放入 37℃5% CO₂培养箱，接种后 48h 尽量不挪动培养器皿，利于神经元贴壁。
半量换液维持培养：24h 后半量换液，移除漂浮死亡细胞，使用添加 B27 的神经元培养基，每 3 天半量换液；小脑颗粒细胞属于终末分化神经元，不可传代培养，观察细胞突起生长状态。
