产品名称 | 小鼠小梁网细胞 | 组织来源 | 眼球 |
英文名称 | Mouse Trabecular Meshwork Cells | 种属 | 昆明小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3051 |
方法简介 实验室分离的小鼠小梁网细胞采用组织贴块法制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠小梁网细胞经NSE（神经元特异性烯醇化酶）免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）
培养基： 小鼠小梁网细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 梭形、多角形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传2-3代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠小梁网细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：C57BL/6小鼠，每只可获得2-5x10^5个内皮细胞，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、兔抗细胞CD31抗体(用于流式分选)、ECM基质胶
分离纯化步骤
取实验动物目标血管/组织，用预冷PBS冲洗去除血液，仔细分离去除外膜和脂肪组织
将组织剪碎后加入0.25%胰蛋白酶，37度消化15-20分钟，收集消化液
再加入II型胶原酶，37度振荡消化45-60分钟，充分分散组织
消化液经70um和40um滤网依次过滤，300g离心10分钟收集细胞
用含CD31抗体的磁珠进行阳性/阴性分选，或采用差速贴壁法去除成纤维细胞，收集CD31+内皮细胞
原代培养要点
将纯化后的内皮细胞接种于明胶预包被的培养皿中，使用ECM基质胶包被可显著提高贴壁率
接种密度建议3x10^4 cells/cm2，37度、5% CO2培养，内皮细胞通常24-72小时贴壁
使用内皮细胞专用培养基(含20%FBS、EGF 5ng/mL、FGF 2ng/mL、肝素10ug/mL)
每2-3天换液一次，细胞融合至80-90%时可用0.05%胰蛋白酶-EDTA传代
常见问题优化
内皮细胞被成纤维细胞污染：采用差速贴壁法2-3次，或CD31磁珠分选提高纯度
内皮细胞凋亡：培养基中添加ROCK抑制剂Y-27632(10uM)可显著提高存活率
表达内皮标志物下降：传代次数控制在3代以内，冻存早期细胞以备后续使用
大鼠磷酸化酪氨酸激酶(p-TrK)elisa试剂盒 | Hs 294T黑素瘤 |
大鼠受体型蛋白酪氨酸磷酸酶N2(PTPRN2)elisa试剂盒 | 兔嗅球神经干细胞 |
大鼠蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)elisa试剂盒 | 兔脾源性内皮祖细胞 |
大鼠甲状旁腺激素2(PTH2)elisa试剂盒 | 人胎盘绒毛膜细胞 |
大鼠表面活性物质关联蛋白A(SPA)elisa试剂盒 | 人正常结肠上皮细胞 CCD841 CON (STR鉴定正确) |
大鼠别孕烯醇酮;3α,5α四氢孕酮(AP;3α,5αTHP)elisa试剂盒 | 大鼠淋巴管内皮细胞 |
猪骨钙素（BGP;OCN）elisa试剂盒 | 人原代子宫内膜间充质干细胞 |
Nthy-ori 3-1人甲状腺正常细胞专用培养基 | SEMA3D基因过表达细胞株 |
panc02+LUC小鼠胰腺癌荧光素酶标记细胞专用培养基 | HAL基因过表达细胞株 |
人原代主动脉平滑肌细胞专用培养基 | GATAD2B基因过表达细胞株 |
D283Med细胞专用培养基 | BPIFB1基因过表达细胞株 |
人原代Ⅱ型肺泡上皮细胞专用培养基 | DHX33基因过表达细胞株 |
小鼠小梁网细胞大鼠原代巩膜上皮细胞专用培养基 | CTPS2基因过表达细胞株 |
DITNC1细胞专用培养基 | EFCC1基因过表达细胞株 |
眼球组织无菌取材：健康小鼠安乐死后，75% 乙醇消毒眼部周围组织，无菌条件下完整摘取小鼠眼球，放入预冷无菌 PBS 缓冲液，全程避免挤压眼球损伤眼内结构。
显微分离小梁网组织：体视显微镜下，沿角膜缘剪开眼球，去除角膜、虹膜、晶状体等组织，精细分离房角位置的小梁网组织，剔除巩膜、睫状体等周边多余组织，PBS 多次漂洗组织。
组织剪碎酶解消化：把小梁网组织剪碎至约 1 mm 碎块，转移至含 Ⅱ 型胶原酶消化液离心管，37℃水浴消化 35‑45 min，每隔数分钟颠倒混匀，使细胞从基质解离出来。
终止消化过滤悬液：加入含胎牛血清的小梁网完全培养基终止消化，反复轻柔吹打组织，70 μm 细胞筛过滤悬液，除去未消化的结缔组织残渣，收集单细胞悬液。
离心洗涤纯化细胞沉淀：1000 r/min 离心 7‑8 min，弃上层废液，小梁网细胞完全培养基重悬细胞沉淀，再次离心洗涤一遍，去除残留消化酶、眼组织碎片。
接种培养瓶贴壁孵育：调整细胞悬液密度接种于细胞培养瓶，放置 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱，接种 48 小时内不要晃动培养瓶，方便小梁网细胞贴壁铺展。
换液传代维持细胞特性：培养 24‑36h 进行首次换液，去除悬浮死细胞；每 2‑3 天更换培养基；细胞汇合 80% 左右传代，严格控制胰酶消化时间，减少成纤维细胞混杂。
