小鼠胃平滑肌细胞
采用组织块贴壁法从C57BL/6小鼠的胃平滑肌细胞来源组织中分离原代细胞，经胰蛋白酶消化传代后，接种于明胶包被的培养皿中，使用 DMEM/F12 培养基（含 10% FBS、1% 双抗及 10 ng/mL PDGF-BB）培养；通过免疫荧光染色检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、平滑肌肌球蛋白重链（SM-MHC）及 h-caldesmon 等平滑肌特异性标志物，结合细胞形态学观察（梭形、蜂房样排列）确认平滑肌细胞身份。
产品名称：小鼠胃平滑肌细胞
英文名称： Mouse Gastric Smooth Muscle Cells
组织来源： 胃组织
默认种属 ：昆明小鼠
产品规格：5×10^5Cells/T25
方法简介 实验室分离的小鼠胃平滑肌细胞采用胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠胃平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 小鼠胃平滑肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠胃平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
细胞复苏：取出小鼠胃平滑肌细胞冻存管，37℃水浴快速摇晃融化冻存液，冻存液融化完毕，酒精消毒管壁，带入超净工作台。
稀释冻存悬液：无菌条件下将冻存管细胞悬液转移至装有预热胃平滑肌细胞完全培养基的 15mL 离心管，轻柔吹打混匀，稀释冻存保护试剂。
离心收集细胞沉淀：离心管配平，1000r/min 离心 5min，离心结束，小心吸弃全部上清液体，保留管底细胞沉淀。
重悬打散细胞：加入胃平滑肌细胞完全培养基，轻柔吹打沉淀，打散细胞团聚，制备分散的单细胞悬液。
计数铺板接种：取样台盼蓝染色计数活细胞，按照实验设定密度接种培养器皿，十字晃动培养板，均匀铺散细胞。
恒温孵育贴壁：放置 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育 24h，静置培养，减少外界扰动，利于平滑肌细胞贴壁伸展。
换液及功能检测：显微镜观察长梭形平滑肌细胞形态，弃旧培养基更换新鲜培养基；细胞生长稳定，开展收缩功能、胃肠药物筛选体外实验。
1.取材时需迅速分离目标血管组织，用含肝素的PBS冲洗管腔去除残留血液，整个过程控制在15分钟以内。
2.培养器皿需提前用0.1mg/ml多聚赖氨酸包被过夜，未包被的培养板细胞贴壁效率极低。
3.内皮细胞体外具有增殖能力，传代比例建议1:3至1:4，细胞融合达80-90%时需及时传代避免接触抑制。
4.培养基中需添加10ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和10ug/ml肝素，促进内皮细胞增殖并维持表型。
5.传代时用PBS轻柔洗涤2次后加入0.25%胰蛋白酶，室温作用2-3分钟收集细胞。
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