小鼠外周血中性粒细胞

小鼠外周血中性粒细胞

运用 Percoll 密度梯度离心法从C57BL/6小鼠外周血中性粒细胞外周血或组织中提取单个核细胞，经免疫磁珠分选（MACS）或流式分选（FACS）纯化目标免疫细胞亚群后，接种于纤连蛋白包被的培养表面，使用含细胞因子（IL-4、IL-13 或 GM-CSF）的 IMDM 培养基培养；通过流式细胞术多色分析 CD11c、MHC-II、CD80/86 等共刺激分子表达谱，结合 ELISA 检测细胞因子（TNF-α、IL-6、IL-10）分泌水平鉴定免疫细胞功能表型。

产品名称：小鼠外周血中性粒细胞

英文名称： Mouse Peripheral Blood Neutrophils

组织来源： 外周血

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠外周血中性粒细胞采用取外周血、通过密度梯度离心法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠外周血中性粒细胞经瑞氏染色法，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠外周血中性粒细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 悬浮

细胞形态： 圆形

传代比例： 不传代

传代特性： 不增殖；不传代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠外周血中性粒细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞复苏：取出小鼠外周血中性粒细胞冻存管，37℃水浴快速融化冻存液，冻存液完全融化，75% 酒精消毒冻存管外壁，带入超净工作台。

稀释冻存细胞悬液：冻存管细胞悬液转移至预温中性粒细胞完全培养基的 15mL 离心管，轻柔吹打混匀，稀释冻存保护剂，中性粒细胞体外存活时间短，全程操作快速。

离心富集细胞沉淀：离心管配平，1000r/min 离心 5min，离心结束，轻柔吸弃上清，避免吹散松散细胞沉淀。

重悬制备悬浮悬液：加入中性粒细胞完全培养基，轻柔吹打沉淀，充分重悬细胞，得到均匀悬浮细胞悬液。

计数调整细胞浓度：取样台盼蓝染色计数活细胞，快速调整至实验浓度，接种悬浮培养器皿。

培养箱短时孵育：放置 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱短时孵育，该细胞体外寿命有限，复苏后尽快开展功能实验。

细胞功能检测：不建议长时间培养，镜检细胞活力，复苏完成后直接用于趋化、吞噬、氧化爆发等体外功能检测。

1.实验全程需在生物安全柜中操作，避免空气中的微生物污染培养体系。

2.培养板需预先用胶原I型(50ug/ml)包被过夜，以增强细胞贴壁能力。

3.该细胞对培养条件较为敏感，建议初次培养时设置多个平行实验以提高成功率。

4.添加5ng/ml转化生长因子-beta(TGF-beta)以调节细胞表型和功能维持。

5.该细胞传代比例为1:2至1:3，每3-4天换液一次，避免过度融合影响细胞状态。