产品名称 | 小鼠外周血淋巴细胞 | 组织来源 | 外周血 |
英文名称 | Mouse Peripheral Blood Lymphocytes | 种属 | 昆明小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3305 |
方法简介 实验室分离的小鼠外周血淋巴细胞采用取外周血、通过密度梯度离心法制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠外周血淋巴细胞，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 小鼠外周血淋巴细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 悬浮
细胞形态： 圆形
传代比例： 不传代
传代特性： 不增殖；不传代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠外周血淋巴细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：C57BL/6小鼠，采集血液或提取组织免疫细胞
试剂：Ficoll密度梯度分离液、PBS缓冲液、DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、RPIM-1640或DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
采集实验动物全血或获取组织悬液，用PBS稀释至适当体积
缓慢叠加于Ficoll密度梯度分离液上方，室温2000rpm离心20分钟
收集界面白色单个核细胞层，用PBS洗涤2次，300g离心8分钟
用含10%FBS的RPIM-1640完全培养基重悬细胞，计数并检测活力
可采用磁珠分选法进一步富集目标免疫细胞亚群(如CD11b+巨噬细胞、CD3+T细胞等)
原代培养要点
免疫细胞多为悬浮或弱贴壁生长，使用完全培养基RPIM-1640+10%FBS+1%双抗
37度、5% CO2培养，初始接种密度建议1x10^6 cells/mL
巨噬细胞培养可添加M-CSF(20ng/mL)促进增殖和维持表型
T细胞培养需添加IL-2(10ng/mL)和抗CD3/CD28抗体刺激增殖
常见问题优化
免疫细胞活力差：操作全程保持低温，避免反复离心和吹打
细胞凋亡：培养基中添加IL-4(20ng/mL)和IL-10(10ng/mL)可抑制巨噬细胞凋亡
纯度不够：采用MACS磁珠分选可获得纯度>95%的目标免疫细胞
大鼠酪酪肽(PYY)elisa试剂盒 | MHCC97-H/LUC (STR)高转移人肝癌细胞 |
大鼠糖原磷酸化酶M(PYGM)elisa试剂盒 | 兔脾基质细胞 |
大鼠糖原磷酸化酶2(PYGL2)elisa试剂盒 | 兔表皮干细胞 |
大鼠胶原吡啶交联(PYD)elisa试剂盒 | 小鼠小肠平滑肌细胞 |
大鼠胞壁酰二肽3(MDP3)elisa试剂盒 | 小鼠黑色素瘤细胞B16-F1（种属鉴定） |
大鼠胞苷脱氨酶(CDA)elisa试剂盒 | 兔肺动脉平滑肌细胞 |
猪核糖核酸酶L（RNASEL）elisa试剂盒 | 小鼠原代子宫内膜干细胞 |
NCI-N87人胃癌细胞专用培养基 | GARIN1B基因过表达细胞株 |
OP9小鼠骨髓基质细胞专用培养基 | CCNI2基因过表达细胞株 |
兔原代肺微血管内皮细胞专用培养基 | DDX4基因过表达细胞株 |
COS-7细胞专用培养基 | DPP10基因过表达细胞株 |
人原代扁桃体成纤维细胞专用培养基 | GPR173基因过表达细胞株 |
小鼠外周血淋巴细胞大鼠原代肝间质细胞专用培养基 | FBXW8基因过表达细胞株 |
CTX-TNA2细胞专用培养基 | CYP2A13基因过表达细胞株 |
细胞复苏：取出小鼠外周血淋巴细胞冻存管，37℃水浴快速融化冻存液，冻存液完全融化，75% 酒精消毒冻存管外壁，移入超净工作台。
稀释冻存细胞悬液：冻存管细胞悬液转移至装有预热 RPMI‑1640 淋巴细胞完全培养基的 15mL 离心管，轻柔吹打混匀，降低冻存保护剂毒性。
离心富集细胞沉淀：离心管配平，1000r/min 离心 5min，离心结束，缓慢吸弃上清，淋巴细胞沉淀松散，操作轻柔防止细胞丢失。
重悬悬浮细胞：加入淋巴细胞完全培养基，轻柔吹打沉淀，充分重悬，制备均匀悬浮细胞悬液。
计数调整细胞浓度：取样台盼蓝染色计数活细胞，调整至实验所需浓度，接种竖立悬浮培养瓶。
培养箱悬浮孵育：放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱竖立静置孵育 24h，悬浮培养，不要平放。
离心换液与刺激实验：离心方式更换培养基，镜检细胞活力；可开展淋巴细胞增殖、免疫活化相关体外实验。
