小鼠视网膜前体细胞

小鼠视网膜前体细胞

基于酶消化-差速贴壁联合策略从C57BL/6小鼠视网膜前体细胞组织获取目标细胞，经密度梯度离心和预培养纯化后接种于特异性基质包被培养皿中，采用优化培养基体系（含 10% FBS 及针对性添加剂）维持培养；通过免疫细胞化学、流式细胞术及分子生物学方法综合鉴定细胞类型，并评估其体外增殖与功能特性。

产品名称：小鼠视网膜前体细胞

英文名称： Mouse Retinal Progenitor Cells

组织来源： 视网膜组织

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠视网膜前体细胞采用胰蛋白酶消化法结合专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠视网膜前体细胞经Nestin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠视网膜前体细胞完全培养基(含B-27 Supplement、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 半贴壁半悬浮

细胞形态： 圆形

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠视网膜前体细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞复苏：取出小鼠视网膜前体细胞冻存管，37℃水浴快速融化冻存液，冻存液完全融化，酒精消毒管壁，带入超净工作台。

稀释冻存悬液：无菌将冻存管细胞悬液转移至装有预热视网膜前体细胞完全培养基的 15mL 离心管，轻柔吹打混匀，稀释冻存保护剂。

离心收集细胞沉淀：离心管配平，1000r/min 离心 5min，离心完成，小心吸弃全部上清液体，保留管底细胞沉淀。

温和重悬细胞：加入视网膜前体细胞完全培养基，轻柔吹打沉淀，打散细胞团，前体细胞比较敏感，吹打力度严格控制。

计数铺板接种：取样台盼蓝染色计数活细胞，按照实验密度接种包被处理的培养板，十字晃动培养板，均匀铺板。

恒温孵育培养：放置 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育 24‑48h，减少外界扰动，利于细胞存活与贴壁。

换液及分化观察：镜检细胞存活贴壁情况，吸弃旧培养基更换新鲜培养基；持续观察细胞增殖分化状态，用于视网膜分化诱导相关体外研究。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.培养器皿需用0.1%明胶溶液包被30分钟以上，去除未结合明胶后使用。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.该细胞传代比例为1:2至1:3，每3-4天换液一次，避免过度融合影响细胞状态。