产品名称 | 小鼠外周血白细胞 | 组织来源 | 外周血 |
英文名称 | Mouse Peripheral Blood Leukocytes | 种属 | 昆明小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2784 |
方法简介 实验室分离的小鼠外周血白细胞采用取外周血、通过密度梯度离心法制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠外周血白细胞，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 小鼠外周血白细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 悬浮
细胞形态： 圆形
传代比例： 不传代
传代特性： 不增殖；不传代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠外周血白细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：C57BL/6小鼠，采集血液或提取组织免疫细胞
试剂：Ficoll密度梯度分离液、PBS缓冲液、DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、RPIM-1640或DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
采集实验动物全血或获取组织悬液，用PBS稀释至适当体积
缓慢叠加于Ficoll密度梯度分离液上方，室温2000rpm离心20分钟
收集界面白色单个核细胞层，用PBS洗涤2次，300g离心8分钟
用含10%FBS的RPIM-1640完全培养基重悬细胞，计数并检测活力
可采用磁珠分选法进一步富集目标免疫细胞亚群(如CD11b+巨噬细胞、CD3+T细胞等)
原代培养要点
免疫细胞多为悬浮或弱贴壁生长，使用完全培养基RPIM-1640+10%FBS+1%双抗
37度、5% CO2培养，初始接种密度建议1x10^6 cells/mL
巨噬细胞培养可添加M-CSF(20ng/mL)促进增殖和维持表型
T细胞培养需添加IL-2(10ng/mL)和抗CD3/CD28抗体刺激增殖
常见问题优化
免疫细胞活力差：操作全程保持低温，避免反复离心和吹打
细胞凋亡：培养基中添加IL-4(20ng/mL)和IL-10(10ng/mL)可抑制巨噬细胞凋亡
纯度不够：采用MACS磁珠分选可获得纯度>95%的目标免疫细胞
大鼠受体活性修饰蛋白1(RAMP1)elisa试剂盒 | JHH-6肝癌 |
大鼠Ras相关C3肉毒菌毒素底物1(Rac1)elisa试剂盒 | 兔皮下微血管内皮细胞 |
大鼠蛋白Z(PZ)elisa试剂盒 | 兔附睾上皮细胞 |
大鼠吡啶酚(pyridol)elisa试剂盒 | 兔角膜基质细胞 |
大鼠半胱氨酰白三烯受体1(CYSLTR1)elisa试剂盒 | 人外周血淋巴细胞8E5(STR鉴定正确) |
大鼠半乳糖苷酶(GAL)elisa试剂盒 | 绵羊前脂肪细胞 |
猪核转录因子p65（NF-KB p65）elisa试剂盒 | 兔原代主动脉弓平滑肌细胞 |
NCI-H929人骨髓瘤细胞专用培养基 | ENTPD3基因过表达细胞株 |
NG108-15小鼠神经瘤与大鼠神经胶质瘤之融合细胞专用培养基 | ADRA2A基因过表达细胞株 |
兔原代颌下腺上皮细胞专用培养基 | CALCR基因过表达细胞株 |
COLO320 细胞专用培养基 | ZNF618基因过表达细胞株 |
人原代扁桃体上皮细胞专用培养基 | DNAAF4基因过表达细胞株 |
小鼠外周血白细胞大鼠原代腹腔主动脉外膜成纤维细胞专用培养基 | WDR93基因过表达细胞株 |
CT26.WT细胞专用培养基 | FOXL2基因过表达细胞株 |
细胞复苏：取出小鼠外周血白细胞冻存管，37℃水浴快速融化冻存液，冻存液完全融化，75% 酒精消毒管壁，带入超净工作台。
稀释冻存细胞悬液：冻存管内细胞悬液缓慢转移至装有预热 RPMI‑1640 完全培养基的 15mL 离心管，轻柔吹打混匀，降低冻存保护剂毒性，悬浮细胞操作避免剧烈震荡。
离心富集细胞沉淀：离心管配平，1000r/min 离心 5min，离心结束，小心吸走上层全部上清液，悬浮细胞沉淀松散，吸上清时靠近液面缓慢吸取。
重悬制备悬浮细胞悬液：加入外周血白细胞专用完全培养基，轻柔吹打管底沉淀，充分重悬细胞，白细胞为悬浮细胞，无需追求贴壁。
活细胞计数接种：取样台盼蓝染色计数活细胞，按照实验所需细胞密度接种培养瓶，悬浮细胞直接混匀，无需铺板摇晃。
培养箱悬浮孵育：放置 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置悬浮培养 24h，培养瓶保持竖立状态，不要平放。
换液及细胞状态检测：采用离心换液方式处理悬浮细胞，显微镜观察细胞活力；细胞状态良好，可开展免疫刺激、细胞因子检测相关实验。
